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【摘要】 目的：用冰冻亚型红细胞选择适合本单位使用的单克隆抗血清试剂。方法：将日常工作中确认或经上级单位协助确认的ABO亚型红细胞进行冰冻保存，融化洗涤后分别与6个不同生产厂家(分别以A、B、C、D、E、F表示)的单克隆抗血清试剂反应，观察试剂对弱抗原的识别敏感性。结果：6家单克隆抗血清对亚型标本的检出率存在一定差异，充分证明单克隆抗血清试剂可造成亚型漏检，应引起使用单位及生产厂家的注意并采取必要的措施。结论：本站用冰冻亚型红细胞选择6个生产厂家的单克隆抗血清，分别用于体采科初检和检验科复检，在一定程度上提高了亚型检出率，值得提倡和推广。同时，冰冻亚型红细胞还可作为弱阳性质控品用于检验科的血型鉴定；作为实验标本用于医院供血库的血型血清学质控考评以及全市或站内输血专业技能竞赛等，对提高亚型检出率，进一步保证临床输血安全具有一定的促进作用。
【关键词】 亚型红细胞； 抗血清； 选择； 应用
doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2012.19.042
ABO血型是人类血型系统中抗原免疫性最强，与输血安全关系最为密切的血型系统。张旭等[1]在分析355例输血相关的死亡病例时发现，51%的死亡是因输入ABO不相容的血液制品所引起，其中ABO血型鉴定错误占1/3。因此，准确鉴定无偿献血者的ABO血型，是各级采供血机构最基本的重要工作之一。在影响血型鉴定的诸多因素中，单克隆抗血清试剂的质量是导致ABO血型误判或漏检的原因之一，特别是抗原比较弱的ABO亚型[2-7]，给安全输血带来极大隐患。因此，笔者所在站尝试将ABO亚型红细胞进行冰冻保存，并对6个生产厂家(分别以A、B、C、D、E、F表示)的单克隆抗血清进行检测和选择，取得了良好的效果，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料 20%葡萄糖注射液(开封制药集团有限公司)；PVC冷冻管、一次性塑料吸管(浙江拱东医疗科技有限公司)；Eppendorf移液器(上海富众生物科学有限公司)；HH W21 600型电热恒温水浴箱(北京光明医疗仪器厂)；YDS-3亚西牌液氮生物容器(四川亚西橡塑机器有限公司低温设备厂)。
1.2 制备冰冻红细胞
1.2.1 标本选择 选择日常工作中确认或经上级单位协助确认的ABO亚型标本7份，分别为A3、B3、Ax、AｘB、Bｘ、ABｘ、B(A)红细胞各1份， 其中B(A)表型与人源抗-A的凝集强度为“±”，A3、B3与人源抗血清的凝集强度为“2﹢mf”， Ax、AｘB、Bｘ、ABｘ的弱抗原与人源抗血清的凝集强度均为“1﹢”，且以上标本保存期﹤6 d，各种传染性指标检测均为阴性。
1.2.2 红细胞冷冻 在选择好的红细胞标本中等量加入20%的葡萄糖注射液，混匀。从液氮罐中移出部分液氮，迅速用一次性滴管直接将血液喷散进液氮中，形成的血液小珠分装于PVC冷冻管，立即置液氮中保存备用[8]。
1.3 对6家单克隆抗血清的选择
1.3.1 融化红细胞 试验前从液氮中取出冰冻红细胞小珠，直接放入38 ℃预热的温盐水中融化，洗涤3次备用[8]。
1.3.2 操作步骤 于每一种抗-A、抗-B中，分别等量加入2%~5%的A3、B3、Ax、AｘB、Bｘ、ABｘ及B(A)红细胞悬液，于22 ℃反应15 min和1 h，以3400 r/min离心15 s，肉眼观察凝集情况。
2 结果
6家单克隆抗血清与亚型红细胞的反应结果，见表1。
3 讨论
实验结果表明，6家单克隆抗血清对亚型标本的检出率存在一定差异。其中最出乎意料的是C厂家试剂，因其效价高、亲和力强而被许多血站长期使用，但该试剂对7份亚型标本的检出率却为0，充分证明单克隆抗体试剂确实可导致亚型漏检，应引起使用单位及生产厂家的足够重视并采取相应措施。笔者所在站根据试验结果，选择F试剂用于体采科初检，而检验科复检则选择试剂D。这样匹配试剂，可使检验科更多发现可疑的亚型标本，除了正反定型不符(包括凝集明显减弱的标本)的标本外，还较易发现与体采科初检结果不符的标本，从而有效防止亚型漏检。笔者所在站自2010年1月采取此项措施后，检验科共发现5例初复检结果不符标本，经血型室确认后均为亚型，其中有2例罕见的B(A)表型。由此可见，选用两家单克隆试剂用于献血者血型的初复检，可在一定程度上提高亚型检出率，值得提倡和推广。
另外，笔者还利用甘油作为冷冻剂对亚型红细胞标本进行冰冻保存，无需特殊的液氮设备，成本低廉，简单易行，且制备的冰冻红细胞质量稳定，用MAP保存液于2~6 ℃冰箱储存可使用30 d。目前，已累积比较典型的ABO亚型标本23例(含家系调查)，在工作实践中进行了应用并取得良好效果。比如用A2、A2B细胞鉴定抗A1，从而使某些亚型得到确认；对本站每批购进的单克隆抗A、抗B试剂进行进货验证；作为弱阳性质控品用于检验科的血型鉴定；作为实验标本用于医院供血库的血型血清学质控考评以及全市或站内输血专业技能竞赛等(笔者在另一篇文章中详述)。从实际使用中笔者体会到，冰冻亚型红细胞在以上日常工作中的适当应用，对提高本地区ABO亚型检测的整体水平起到了一定的促进作用，不失为一种既经济又有效的办法。
参考文献
[1] 张旭，李剑平.455例ABO正反定型不符原因分析[J].中国输血杂志，2010，23(8):623-624.
[2] 刘丽.Am亚型1例[J].中国输血杂志，2006，19(1):66-67.
[3] 龚裕春，黄晨佳，邱颖婕，等.2组洗涤溶液制备冰冻解冻去甘油红细胞的效果比较[J].中国输血杂志，2010，23(9):692-693.
[4] 方建华，刘玉振，温涛.国产单克隆抗体试剂漏检AX1例[J].中国输血杂志，2004，17(2):119.
[5] 徐洪卫.街头无偿献血漏检AXB亚型1例[J].临床输血与检验，2006，8(1):57.
[6] 王宏法，刘玉振.国产血型定型试剂导致BX亚型漏检1例原因分析[J].中国误诊学杂志，2008，8(25):6152.
[7] 宿兰，杨世英，廉维，等.罕见的B(A)表型血清学及基因检测[J].中国输血杂志，2010，23(3):200-202.
[8] 李勇，杨贵贞.人类红细胞血型学实用理论与实验技术[M].北京:中国科学技术出版社，1999:224-233.
(收稿日期：2012-04-23) (本文编辑：连胜利)
【关键词】 亚型红细胞； 抗血清； 选择； 应用
doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2012.19.042
ABO血型是人类血型系统中抗原免疫性最强，与输血安全关系最为密切的血型系统。张旭等[1]在分析355例输血相关的死亡病例时发现，51%的死亡是因输入ABO不相容的血液制品所引起，其中ABO血型鉴定错误占1/3。因此，准确鉴定无偿献血者的ABO血型，是各级采供血机构最基本的重要工作之一。在影响血型鉴定的诸多因素中，单克隆抗血清试剂的质量是导致ABO血型误判或漏检的原因之一，特别是抗原比较弱的ABO亚型[2-7]，给安全输血带来极大隐患。因此，笔者所在站尝试将ABO亚型红细胞进行冰冻保存，并对6个生产厂家(分别以A、B、C、D、E、F表示)的单克隆抗血清进行检测和选择，取得了良好的效果，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料 20%葡萄糖注射液(开封制药集团有限公司)；PVC冷冻管、一次性塑料吸管(浙江拱东医疗科技有限公司)；Eppendorf移液器(上海富众生物科学有限公司)；HH W21 600型电热恒温水浴箱(北京光明医疗仪器厂)；YDS-3亚西牌液氮生物容器(四川亚西橡塑机器有限公司低温设备厂)。
1.2 制备冰冻红细胞
1.2.1 标本选择 选择日常工作中确认或经上级单位协助确认的ABO亚型标本7份，分别为A3、B3、Ax、AｘB、Bｘ、ABｘ、B(A)红细胞各1份， 其中B(A)表型与人源抗-A的凝集强度为“±”，A3、B3与人源抗血清的凝集强度为“2﹢mf”， Ax、AｘB、Bｘ、ABｘ的弱抗原与人源抗血清的凝集强度均为“1﹢”，且以上标本保存期﹤6 d，各种传染性指标检测均为阴性。
1.2.2 红细胞冷冻 在选择好的红细胞标本中等量加入20%的葡萄糖注射液，混匀。从液氮罐中移出部分液氮，迅速用一次性滴管直接将血液喷散进液氮中，形成的血液小珠分装于PVC冷冻管，立即置液氮中保存备用[8]。
1.3 对6家单克隆抗血清的选择
1.3.1 融化红细胞 试验前从液氮中取出冰冻红细胞小珠，直接放入38 ℃预热的温盐水中融化，洗涤3次备用[8]。
1.3.2 操作步骤 于每一种抗-A、抗-B中，分别等量加入2%~5%的A3、B3、Ax、AｘB、Bｘ、ABｘ及B(A)红细胞悬液，于22 ℃反应15 min和1 h，以3400 r/min离心15 s，肉眼观察凝集情况。
2 结果
6家单克隆抗血清与亚型红细胞的反应结果，见表1。
3 讨论
实验结果表明，6家单克隆抗血清对亚型标本的检出率存在一定差异。其中最出乎意料的是C厂家试剂，因其效价高、亲和力强而被许多血站长期使用，但该试剂对7份亚型标本的检出率却为0，充分证明单克隆抗体试剂确实可导致亚型漏检，应引起使用单位及生产厂家的足够重视并采取相应措施。笔者所在站根据试验结果，选择F试剂用于体采科初检，而检验科复检则选择试剂D。这样匹配试剂，可使检验科更多发现可疑的亚型标本，除了正反定型不符(包括凝集明显减弱的标本)的标本外，还较易发现与体采科初检结果不符的标本，从而有效防止亚型漏检。笔者所在站自2010年1月采取此项措施后，检验科共发现5例初复检结果不符标本，经血型室确认后均为亚型，其中有2例罕见的B(A)表型。由此可见，选用两家单克隆试剂用于献血者血型的初复检，可在一定程度上提高亚型检出率，值得提倡和推广。
另外，笔者还利用甘油作为冷冻剂对亚型红细胞标本进行冰冻保存，无需特殊的液氮设备，成本低廉，简单易行，且制备的冰冻红细胞质量稳定，用MAP保存液于2~6 ℃冰箱储存可使用30 d。目前，已累积比较典型的ABO亚型标本23例(含家系调查)，在工作实践中进行了应用并取得良好效果。比如用A2、A2B细胞鉴定抗A1，从而使某些亚型得到确认；对本站每批购进的单克隆抗A、抗B试剂进行进货验证；作为弱阳性质控品用于检验科的血型鉴定；作为实验标本用于医院供血库的血型血清学质控考评以及全市或站内输血专业技能竞赛等(笔者在另一篇文章中详述)。从实际使用中笔者体会到，冰冻亚型红细胞在以上日常工作中的适当应用，对提高本地区ABO亚型检测的整体水平起到了一定的促进作用，不失为一种既经济又有效的办法。
参考文献
[1] 张旭，李剑平.455例ABO正反定型不符原因分析[J].中国输血杂志，2010，23(8):623-624.
[2] 刘丽.Am亚型1例[J].中国输血杂志，2006，19(1):66-67.
[3] 龚裕春，黄晨佳，邱颖婕，等.2组洗涤溶液制备冰冻解冻去甘油红细胞的效果比较[J].中国输血杂志，2010，23(9):692-693.
[4] 方建华，刘玉振，温涛.国产单克隆抗体试剂漏检AX1例[J].中国输血杂志，2004，17(2):119.
[5] 徐洪卫.街头无偿献血漏检AXB亚型1例[J].临床输血与检验，2006，8(1):57.
[6] 王宏法，刘玉振.国产血型定型试剂导致BX亚型漏检1例原因分析[J].中国误诊学杂志，2008，8(25):6152.
[7] 宿兰，杨世英，廉维，等.罕见的B(A)表型血清学及基因检测[J].中国输血杂志，2010，23(3):200-202.
[8] 李勇，杨贵贞.人类红细胞血型学实用理论与实验技术[M].北京:中国科学技术出版社，1999:224-233.
(收稿日期：2012-04-23) (本文编辑：连胜利)