【摘 要】
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目的:分析C基因及其编码蛋白突变对登革病毒RNA复制的影响。方法:利用融合PCR方法在登革病毒复制子中引入C基因相应部位的缺失突变,将复制子RNA转染细胞后,利用报告基因活性
【机 构】
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军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室,
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目的:分析C基因及其编码蛋白突变对登革病毒RNA复制的影响。方法:利用融合PCR方法在登革病毒复制子中引入C基因相应部位的缺失突变,将复制子RNA转染细胞后,利用报告基因活性分析、间接免疫荧光及实时定量PCR等方法分析其复制水平。结果:获得了含有不同α螺旋缺失突变的C基因的复制子质粒,并发现Δα1复制子复制水平明显下降。结论:登革病毒C蛋白α1螺旋或其编码序列对病毒RNA复制具有重要作用。
Objective: To analyze the effect of mutation of C gene and its encoded protein on dengue virus RNA replication. Methods: The degenerative mutation of C gene was introduced into dengue virus replicon by fusion PCR. After replicon RNA was transfected into cells, reporter gene activity assay, indirect immunofluorescence and real-time quantitative PCR were used to analyze the replication level . Results: The replicon plasmids of C gene containing different α helix deletion mutations were obtained and the replication level of Δα1 replicon was significantly decreased. Conclusion: The dengue virus C protein α1 helix or its coding sequence plays an important role in viral RNA replication.
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