【摘 要】
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巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)对器官移植患者、产妇及新生儿等免疫功能失调人群的危害极大.目前,临床检测CMV的主要方法为荧光定量PCR法(Quantitative polymerase chain reaction,qPCR),但其检测成本高,仪器操作复杂,不适于现场快速检测.环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种超灵敏且简单快速的核酸检测技术,其扩增效率优于qPCR,但其引物间易产生二聚体,导致非特异性扩增,从
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巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)对器官移植患者、产妇及新生儿等免疫功能失调人群的危害极大.目前,临床检测CMV的主要方法为荧光定量PCR法(Quantitative polymerase chain reaction,qPCR),但其检测成本高,仪器操作复杂,不适于现场快速检测.环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种超灵敏且简单快速的核酸检测技术,其扩增效率优于qPCR,但其引物间易产生二聚体,导致非特异性扩增,从而出现假阳性结果.本研究针对LAMP扩增产物中的DNA单链环状结构,设计了两段序列互补的探针,分别连接磁珠(Magnetic beads,MNs)和修饰有拉曼探针信号分子4-巯基苯甲酸(4-Mercaptobenzoic acid,4-MBA)的银纳米粒子(Sliver nanoparticles,AgNPs),二者与环状结构结合,形成MNs-LAMP产物-AgNPs复合物.通过磁场富集此复合物,表面增强拉曼散射(Surface enhanced Raman scattering,SERS)光谱监测结果表明,复合物的SERS信号更强.采用本方法检测了CMV标准核酸序列,检出限低至1000 copies/mL.本研究在扩增产物结构原理层面上解决了LAMP技术可能出现假阳性结果的问题,对研发新型快速核酸检测技术具有参考价值.
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