【摘 要】
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目的:构建人肌红蛋白(Mb)原核表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。pQE方法:根据已报道的人Mb基因序列,采用RT-PCR技术从人骨骼肌组织中获得肌红蛋白cDNA序列。将所得的PC
【机 构】
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吉林大学第一医院中心实验室,解放军第461医院检验科
【基金项目】
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吉林省科技厅社会发展计划项目资助课题(20030450), 吉林省科技厅重点项目资助课题(20030402), 2004年吉林大学创新基金资助课题, 吉林省杰出青年基金资助课题(20050113)
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目的:构建人肌红蛋白(Mb)原核表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。pQE方法:根据已报道的人Mb基因序列,采用RT-PCR技术从人骨骼肌组织中获得肌红蛋白cDNA序列。将所得的PCR产物插入克隆载体pGEM-Teasy中,得重组质粒,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将酶切目的片段插入原核表达载体pQpQEE30中并转化大肠杆菌(E.coli)M15,通过IPTG诱导表达出带有6个组氨酸的融合蛋白。经镍固定金属亲和层析纯化。结果:序列分析表明,人Mb基因成熟肽编码区含有465 bp,编码153个氨基
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