G145R突变后HBsAg “a” 决定簇合成肽的免疫学特性分析

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a522920779a
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目的

研究G145R突变后乙肝表面抗原(HBsAg) "a" 决定簇合成肽的免疫学特性改变情况。

方法

首先合成2条短肽P1-wt和P2-145R,分别代表野毒株和G145R突变后HBsAg "a" 决定簇合成肽。然后用β-巯基乙醇(2-ME)变性试验以及用乙肝疫苗标准品制备的小鼠多抗血清研究2条合成肽的空间构象以及抗原性异同。最后用等量合成肽免疫小鼠,用酶免疫法、竞争抑制试验和Western blot试验等研究G145R突变后 "a" 决定簇合成肽的免疫原性改变。

结果

合成肽P1-wt和P2-145R用2-ME温和变性后,PAGE结果表现为相对分子质量(Mr)为4×103左右的单一条带,而变性前2条合成肽均表现为Mr是从4×103到30×103的弥漫条带,主带位置在5×103和10×103,分别相当于二聚体和四聚体位置;用HBsAg的多克隆抗体(anti-HBs)检测合成肽的抗原性,结果在固定抗原量的前提下,在抗体1:32 000稀释时仍可检测到P1-wt的阳性结果,而当同一抗体稀释到1∶8000时,P2-145R检测结果即为阴性。合成肽P2-145R免疫小鼠产生的抗体与P1-wt合成肽的反应滴度比与P2-145R合成肽本身的反应低4~8倍。

结论

针对HBsAg "a" 决定簇合成肽可自发形成一定的空间构象,G145R突变株的HBsAg "a" 决定簇的抗原性和免疫原性与野毒株相比发生了明显改变,为正确评价G145R变异株的流行危害以及现行疫苗的保护效果提供了实验依据。

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