【摘 要】
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目的 构建Livin靶向SiRNA重组表达载体,研究其对人大肠癌细胞生长的抑制作用和对5-氟尿嘧啶(5-Fu)的化疗增敏作用.方法 构建Livin靶向siRNA重组表达载体并转染大肠癌细胞;通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测Livin siRNA对大肠癌细胞Livin mRNA和蛋白表达的抑制率;采用噻唑蓝(MTT)比色法分别于转染后24、48、72 h用自
【机 构】
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目的 构建Livin靶向SiRNA重组表达载体,研究其对人大肠癌细胞生长的抑制作用和对5-氟尿嘧啶(5-Fu)的化疗增敏作用.方法 构建Livin靶向siRNA重组表达载体并转染大肠癌细胞;通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测Livin siRNA对大肠癌细胞Livin mRNA和蛋白表达的抑制率;采用噻唑蓝(MTT)比色法分别于转染后24、48、72 h用自动酶标读数仪(波长490 nm)测定每孔A值来计算大肠癌细胞抑制率;采用流式细胞仪于转染后48 h在488 nm波长下检测细胞的凋亡率的变化.结果 经酶切鉴定和测序结果证实Livin靶向SiRNA重组表达载体构建成功.RT-PCR检测和Western blot方法检测Livin siRNA对大肠癌细胞Livin mRNA和蛋白表达的抑制率为分别为30.18%和28.88%,可以协同5-Fu增强对大肠癌细胞生长的抑制.结论 Livin向siRNA重组表达载体构建成功,它能有效抑制Livin基因表达并能协同5-Fu增强对大肠癌细胞的杀伤作用和诱导凋亡作用。
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体内噬菌体技术则将噬菌体展示技术与动物模型相结合,可以更好地进行肿瘤组织特异性结合肽的筛选.Pasqualini等~[1]和Wadih等~[2]利用该方法筛选出了特异结合脑和肾的噬菌体克隆,1997年他们成功筛选到一条恶性黑色素瘤及乳腺癌上整合蛋白的特异性亲和短肽,,把该肽与化疗药物耦联后进行动物实验,收到了很好的抗肿瘤效果。
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