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【摘 要】 目的：通过对浙江省中国人群AS疾病的流行病学进行调查，探讨ERAP1基因多态性与HLA-B27阳性AS患者的关联性。方法：选取风湿科门诊确诊的128例AS患者和无自身免疫性及系统性疾病的非AS病史健康对照者154例，通过收集临床资料和视觉模拟评分对浙江省强直性脊柱炎患者进行调查，分析ERAP1基因单核苷酸多态性与HLA-B27的相互作用。结果：AS患者群体中HLA-B27检出率为91.4%，对照健康组为2.58%。ERAP1基因SNP位点：rs27037、rs27434、rs27980在浙江省强直性脊柱炎患者群体中具有强相关性（P< 0.05）。结论：ERAP1基因单核苷酸多态性与强直性脊柱炎的易感性具有强相关性，多个不同种族群体研究表明群体间的ERAP1基因多态性位点存在差异。
【关键词】 强直性脊柱炎；单核苷酸多态性；ERAP1基因
【中图分类号】R593.23 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）04-0085-02
强直性脊柱炎（Ankylosing spondylitis，AS）是一种慢性自身免疫性疾病，以骶髂关节炎和附着点炎为特征。经统计，AS在国外欧洲人群中的患病率为0.5%[1]，而在我国的患病率为0.2%～0.4%[2]。AS遗传多态性的研究表明，超过90%的AS患者呈现HLA-B27阳性，而健康人群仅存在5%。Burton等[3]首次报道了欧洲高加索白种人AS患者中内质网氨基肽酶1基因（endoplasmic reticulum aminopeptidase 1，ERAP1）与AS具有相关性，其发现ERAP1的两个单核苷酸多态性（SingleNucleotidePolymorphism，SNP）位点（rs27044，rs30187）与AS发病相关。因此，ERAP1和HLA-B27的相互作用在AS患者发病机制中具有着重要作用，在中国人群中进行大规模的AS遗传免疫学研究也就具有其重要性和必要性。
1 资料与方法
1.1 研究对象 根据知情同意原则，经温州医学院第一附属医学院伦理委员会同意（NO：2012-092）。本研究组收集风湿科门诊确诊的AS患者128例，另收集的154例对照来自门诊就诊的无自身免疫性和系统性疾病的非AS病史健康人。所有研究对象间无血缘关系且均为汉族，签署知情同意书，并自愿捐献血液样品。
1.2 临床表型评估 所有AS患者需全程参与体检和临床评估，并进行问卷调查。记录患者的一般资料（姓名、年龄、性别和病程等）、发病年龄、家族史及临床表型特征等与AS疾病活动度相关的临床表型评估资料。疼痛评价采用基于自我报告的视觉模拟评分（Visual Analogue Scale，VAS）法评价[4]，包括患者昼、夜疼痛的VAS，病情活动性指数[5]（Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index，BASDAI），功能性指数[6]（BathAnkylosingSpondylitisFunctional Index，BASFI）。
1.3 基因组DNA提取 AS患者与健康对照组于无菌条件下用乙二胺四乙酸（EDTA）-K2 抗凝管采集外周静脉血4ml。血液样品基因组DNA的提取使用AxyPrep Blood Genomic DNA Miniprep Kit （Axygen， UnionCity， CA），DNA浓度检测使用QuantiTPicoGreen dsDNA assay （Invitrogen，Carlsbad， CA），置于-20℃冰箱保存。
1.4 基因分型 通过文献筛选出报道较多的公认的8个ERAP1基因SNP位点，包括rs27038（A/G）， rs27037（G/T），rs27434（A/G），rs27980（A/C），rs7711564（C/G），rs30187（C/T），rs10050860（C/T）和rs17482078（C/T），用于ERAP1基因多态性位点的基因型检测。采用美国Sequenom公司的MassARRAY iPLEX系统进行SNP分型检测。
1.5 统计学处理 病例对照关联分析应用PLINK软件。PLINK进行病例对照群体SNP多态性之间的病例对照关联分析，P< 0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 AS患者的一般特征和临床特点 两组的年龄和性别分布无统计学意义。患者昼、夜疼痛的视觉模拟评分（VAS）分别为（38.10±23.58）和（32.21±21.84）；病情活动性指数（BASDAI）评分为（3.91±2.84）；功能性指数评分为（3.14±2.27）。见表1。AS患者群体中HLA-B27检出率为91.4%，对照健康组为2.58%，AS患者HLA-B27抗原阳性率远超健康人群。说明HLA-B27与AS之间在存关联。
2.2 ERAP1基因多态性位点的AS病例对照关联分析 3个SNP：rs27037、rs27434和rs27980，表现出强相关性（P<0.05）。P值最小的SNP位点为rs27434（P=0.000612），OR值为1.13，95% 置信区间CI为1.031.46。见表2。通过文献筛选处的8个高频ERAP1基因SNP位点在中国浙江人群中的分布具有特殊性，其中仅有3个SNP位点具有AS疾病关联性。
3 讨论
ERAP1是肽结合HLA-Ⅰ类分子（如HLA-B27）过程中相关的重要成分，能够对疏水的羧基末端的9-16个残基的底物进行水解，ERAP1作为抗原提呈过程中的重要蛋白酶在处理外来抗原时与HLA-B27分子联动作用，参与AS的发病。
本实验分析结果显示，患者昼、夜疼痛的视觉模拟评分（VAS）分别为（38.10±23.58）和（32.21±21.84），AS患者疼痛程度高；病情活动性指数（BASDAI）评分为（3.91±2.84），AS患者处于中等疼痛；同时，功能性指数评分为（3.14±2.27），AS患者的活动能力消弱至中等水平。AS患者群体中HLA-B27检出率为91.4%，对照健康组为2.58%，AS患者HLA-B27抗原阳性率远超健康人群。说明HLA-B27影响AS发病机制。ERAP1基因多态性位点的AS病例对照关联分析发现，通过文献筛选出的8个高频ERAP1基因SNP位点在中国浙江人群中的分布具有特殊性，其中仅有3个SNP位点（rs27037、rs27434、rs27980）具有AS疾病关联性。
综上所述，本实验证实了ERAP1基因多态性与HLA-B27的相互作用影响AS发病机制，为ERAP1基因多态性进一步的深度挖掘和AS的诊断治疗提供了可靠依据和重要参考。
参考文献
[1] Evans DM， Spencer CC， Pointon JJ. Interaction between ERAP1 and HLA-B27 in ankylosing spondylitis implicates peptide handling in the mechanism for HLA-B27 in disease susceptibility[J].Nat Genet， 2011，43（8）：761-767.
[2]Davidson SI， Wu X， Liu Y. Association of ERAP1， but not IL23R， with ankylosing spondylitis in a Han Chinese population[J]. Arthritis Rheum， 2010，60（11）：3263-3268.
[3] Burton PR， Clayton DG， Cardon LR. Association scan of 14，500 nonsynonymous SNPs in four diseases identifies autoimmunity variants[J]. Nat Genet， 2007，39（11）：1329-1337.
[4]刘健，盛长健，谢颜丽，等.强直性脊柱炎患者生存质量变化及相关性分析[J].中国康复，2009，24（6）：390-392.
[5]王笙，曾臻，段振华，等.强直性脊柱炎患者生存质量及影响因素分析[J].中华疾病控制杂志，2013，17（5）：384-387.
[6]马延梅，谭平，俞烜华，等.驻闽部队126例强直性脊柱炎患者的生存质量研究[J].2011，42（3）：150-153.
（收稿日期：2015.12.10）
【关键词】 强直性脊柱炎；单核苷酸多态性；ERAP1基因
【中图分类号】R593.23 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）04-0085-02
强直性脊柱炎（Ankylosing spondylitis，AS）是一种慢性自身免疫性疾病，以骶髂关节炎和附着点炎为特征。经统计，AS在国外欧洲人群中的患病率为0.5%[1]，而在我国的患病率为0.2%～0.4%[2]。AS遗传多态性的研究表明，超过90%的AS患者呈现HLA-B27阳性，而健康人群仅存在5%。Burton等[3]首次报道了欧洲高加索白种人AS患者中内质网氨基肽酶1基因（endoplasmic reticulum aminopeptidase 1，ERAP1）与AS具有相关性，其发现ERAP1的两个单核苷酸多态性（SingleNucleotidePolymorphism，SNP）位点（rs27044，rs30187）与AS发病相关。因此，ERAP1和HLA-B27的相互作用在AS患者发病机制中具有着重要作用，在中国人群中进行大规模的AS遗传免疫学研究也就具有其重要性和必要性。
1 资料与方法
1.1 研究对象 根据知情同意原则，经温州医学院第一附属医学院伦理委员会同意（NO：2012-092）。本研究组收集风湿科门诊确诊的AS患者128例，另收集的154例对照来自门诊就诊的无自身免疫性和系统性疾病的非AS病史健康人。所有研究对象间无血缘关系且均为汉族，签署知情同意书，并自愿捐献血液样品。
1.2 临床表型评估 所有AS患者需全程参与体检和临床评估，并进行问卷调查。记录患者的一般资料（姓名、年龄、性别和病程等）、发病年龄、家族史及临床表型特征等与AS疾病活动度相关的临床表型评估资料。疼痛评价采用基于自我报告的视觉模拟评分（Visual Analogue Scale，VAS）法评价[4]，包括患者昼、夜疼痛的VAS，病情活动性指数[5]（Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index，BASDAI），功能性指数[6]（BathAnkylosingSpondylitisFunctional Index，BASFI）。
1.3 基因组DNA提取 AS患者与健康对照组于无菌条件下用乙二胺四乙酸（EDTA）-K2 抗凝管采集外周静脉血4ml。血液样品基因组DNA的提取使用AxyPrep Blood Genomic DNA Miniprep Kit （Axygen， UnionCity， CA），DNA浓度检测使用QuantiTPicoGreen dsDNA assay （Invitrogen，Carlsbad， CA），置于-20℃冰箱保存。
1.4 基因分型 通过文献筛选出报道较多的公认的8个ERAP1基因SNP位点，包括rs27038（A/G）， rs27037（G/T），rs27434（A/G），rs27980（A/C），rs7711564（C/G），rs30187（C/T），rs10050860（C/T）和rs17482078（C/T），用于ERAP1基因多态性位点的基因型检测。采用美国Sequenom公司的MassARRAY iPLEX系统进行SNP分型检测。
1.5 统计学处理 病例对照关联分析应用PLINK软件。PLINK进行病例对照群体SNP多态性之间的病例对照关联分析，P< 0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 AS患者的一般特征和临床特点 两组的年龄和性别分布无统计学意义。患者昼、夜疼痛的视觉模拟评分（VAS）分别为（38.10±23.58）和（32.21±21.84）；病情活动性指数（BASDAI）评分为（3.91±2.84）；功能性指数评分为（3.14±2.27）。见表1。AS患者群体中HLA-B27检出率为91.4%，对照健康组为2.58%，AS患者HLA-B27抗原阳性率远超健康人群。说明HLA-B27与AS之间在存关联。
2.2 ERAP1基因多态性位点的AS病例对照关联分析 3个SNP：rs27037、rs27434和rs27980，表现出强相关性（P<0.05）。P值最小的SNP位点为rs27434（P=0.000612），OR值为1.13，95% 置信区间CI为1.031.46。见表2。通过文献筛选处的8个高频ERAP1基因SNP位点在中国浙江人群中的分布具有特殊性，其中仅有3个SNP位点具有AS疾病关联性。
3 讨论
ERAP1是肽结合HLA-Ⅰ类分子（如HLA-B27）过程中相关的重要成分，能够对疏水的羧基末端的9-16个残基的底物进行水解，ERAP1作为抗原提呈过程中的重要蛋白酶在处理外来抗原时与HLA-B27分子联动作用，参与AS的发病。
本实验分析结果显示，患者昼、夜疼痛的视觉模拟评分（VAS）分别为（38.10±23.58）和（32.21±21.84），AS患者疼痛程度高；病情活动性指数（BASDAI）评分为（3.91±2.84），AS患者处于中等疼痛；同时，功能性指数评分为（3.14±2.27），AS患者的活动能力消弱至中等水平。AS患者群体中HLA-B27检出率为91.4%，对照健康组为2.58%，AS患者HLA-B27抗原阳性率远超健康人群。说明HLA-B27影响AS发病机制。ERAP1基因多态性位点的AS病例对照关联分析发现，通过文献筛选出的8个高频ERAP1基因SNP位点在中国浙江人群中的分布具有特殊性，其中仅有3个SNP位点（rs27037、rs27434、rs27980）具有AS疾病关联性。
综上所述，本实验证实了ERAP1基因多态性与HLA-B27的相互作用影响AS发病机制，为ERAP1基因多态性进一步的深度挖掘和AS的诊断治疗提供了可靠依据和重要参考。
参考文献
[1] Evans DM， Spencer CC， Pointon JJ. Interaction between ERAP1 and HLA-B27 in ankylosing spondylitis implicates peptide handling in the mechanism for HLA-B27 in disease susceptibility[J].Nat Genet， 2011，43（8）：761-767.
[2]Davidson SI， Wu X， Liu Y. Association of ERAP1， but not IL23R， with ankylosing spondylitis in a Han Chinese population[J]. Arthritis Rheum， 2010，60（11）：3263-3268.
[3] Burton PR， Clayton DG， Cardon LR. Association scan of 14，500 nonsynonymous SNPs in four diseases identifies autoimmunity variants[J]. Nat Genet， 2007，39（11）：1329-1337.
[4]刘健，盛长健，谢颜丽，等.强直性脊柱炎患者生存质量变化及相关性分析[J].中国康复，2009，24（6）：390-392.
[5]王笙，曾臻，段振华，等.强直性脊柱炎患者生存质量及影响因素分析[J].中华疾病控制杂志，2013，17（5）：384-387.
[6]马延梅，谭平，俞烜华，等.驻闽部队126例强直性脊柱炎患者的生存质量研究[J].2011，42（3）：150-153.
（收稿日期：2015.12.10）