探讨外源性配体鞭毛蛋白活化TLR5后,对于SPC-A-1细胞生物学行为的影响。
方法选用SPC-A-1细胞作为研究对象,鞭毛蛋白作用浓度为0.1 μg/ml。构建TLR5-shRNA,并转染SPC-A-1细胞。实验分为四组:对照组、TLR5-shRNA组、Flagellin组和TLR5-shRNA+Flagellin组。用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)在0、24、48、72 h检测细胞增殖情况,在48 h分别用TUNEL法检测细胞凋亡,Transwell细胞侵袭实验研究细胞侵袭能力的影响,平板划线培养实验研究细胞迁移能力的影响,细胞集落形成实验研究细胞克隆形成能力。
结果⑴于0、24、48、72 h在570 nm波长处检测各组细胞的光密度值,结果显示,在同一时间点,Flagellin组与其它三组相比,细胞增殖明显受到抑制(P<0.01),TLR5-shRNA+Flagellin组与对照组和TLR5-shRNA组相比,细胞增殖无明显影响(P>0.05)。⑵对照组、TLR5-shRNA组、Flagellin组和TLR5-shRNA+Flagellin组的细胞凋亡率分别为(14.75±0.072)%、(15.09±0.053)%、(21.63±0.047)%、(14.98±0.036)%。与对照组、TLR5-shRNA组和TLR5-shRNA+Flagellin组相比,Flagellin组细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。⑶对照组、TLR5-shRNA组、Flagellin组和TLR5-shRNA+Flagellin组穿膜细胞数分别为39.55±2.31、42.78±3.52、18.75±3.77和38.43±2.98。与对照组、TLR5-shRNA组和TLR5-shRNA+Flagellin组相比,Flagellin组的细胞其侵袭能力明显受到抑制(P<0.01),而对照组、TLR5-shRNA组和TLR5-shRNA+Flagellin组两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。⑷与对照组、TLR5-shRNA组和TLR5-shRNA+Flagellin组相比,Flagellin刺激48 h后,Flagellin组细胞的迁移能力显著下降(P<0.05),而与对照组、TLR5-shRNA组相比,TLR5-shRNA+Flagellin组细胞的迁移能力无明显改变(P>0.05)。⑸对照组、TLR5-shRNA组、Flagellin组和TLR5-shRNA+Flagellin组细胞集落形成率分别为(40.37±3.88)%、(39.88±2.49)%、(13.29±3.76)%、(38.81±4.11)%。与对照组、TLR5-shRNA组和TLR5-shRNA+Flagellin组相比,Flagellin组细胞集落形成率显著减少(P<0.01),与对照组、TLR5-shRNA组相比,TLR5-shRNA+Flagellin组细胞集落率差异无统计学意义(P>0.05)。
结论外源性配体鞭毛蛋白活化TLR5信号通路后,可以抑制SPC-A-1细胞的增殖、转移、侵袭,促进其凋亡,可以作为潜在的治疗靶点。