【摘 要】
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目的 优化白色念珠菌菌丝相培养条件,为白色念珠菌菌丝相的分子生物学研究提供必要条件;建立白色念珠菌菌丝相RAPD的最佳反应体系,应用于其基因组DNA扩增.方法 在RPMI1640培
【机 构】
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皖南医学院微生物学与免疫学教研室,安徽省芜湖市,241002安徽工程大学生化学院,安徽省芜湖市,241000;
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目的 优化白色念珠菌菌丝相培养条件,为白色念珠菌菌丝相的分子生物学研究提供必要条件;建立白色念珠菌菌丝相RAPD的最佳反应体系,应用于其基因组DNA扩增.方法 在RPMI1640培养基的基础上,通过单因素试验研究了小牛血清用量、培养液pH值、培养温度和转种次数等对白色念珠菌菌丝相形成的影响.采用单因素试验,分别研究了Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq酶的浓度、引物浓度和模板DNA浓度对白色念珠菌菌丝相RAPD反应的影响;应用L16(45)正交试验对RAPD反应条件进行了优化.结果 白色念珠菌菌丝相诱导的最佳条件为:每100 ml培养液中的小牛血清用量为10 ml,培养液pH值为7.5,培养温度为36 ℃,转种次数为12次.白色念珠菌菌丝相的最适RAPD反应体系为:Mg2+1.25 mmol/L、dNTPs 0.4 mmol/L、随机引物0.1 μmol/L、TaqDNA聚合酶5 U/50 μl、模板DNA 495 ng/50 μl.结论 通过单因素和正交试验,获得了较适白色念珠菌菌丝相培养条件和其基因组RAPD扩增条件.
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