【摘 要】
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目的 探讨慢病毒载体介导RNA结合蛋白-5(QKI-5)对肺腺癌细胞凋亡的影响.方法 应用GV358(过表达)和GV248(抑制表达)载体分别构建针对QKI-5基因的慢病毒过表达载体和抑制表达载
【机 构】
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浙江省舟山医院细胞分子生物学实验室,浙江舟山,316012;浙江省舟山市妇女儿童医院检验科,浙江舟山,316000
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目的 探讨慢病毒载体介导RNA结合蛋白-5(QKI-5)对肺腺癌细胞凋亡的影响.方法 应用GV358(过表达)和GV248(抑制表达)载体分别构建针对QKI-5基因的慢病毒过表达载体和抑制表达载体,转染293T细胞产生慢病毒颗粒,收集并测定慢病毒滴度.将经测序鉴定的QKI-5过表达的慢病毒或抑制表达的慢病毒转染到肺腺癌细胞H1299,Real-time PCR检测QKI-5 mRNA表达,集落形成实验检测H1299细胞增殖情况,膜联蛋白Ⅴ(annexin Ⅴ)、碘化丙啶(PI)检测H1299细胞凋亡情况,Western blotting检测促凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-8表达.结果 成功构建QKI-5过表达慢病毒载体和抑制表达慢病毒载体,与对照组比较,QKI-5过表达后,QKI-5mRNA表达增加,细胞集落形成减少,肺腺癌细胞早期凋亡增加,促凋亡蛋白Caspase-8表达增加;QKI-5抑制表达后,QKI-5 mRNA表达降低,细胞集落形成增加,但肺腺癌细胞凋亡无明显变化,然而促凋亡蛋白Caspase-8表达减少.结论 慢病毒介导QKI-5抑制增殖,可能通过Caspase-8促进肺腺癌细胞系H1299的凋亡.
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