【摘 要】
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目的 建立内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因敲除大鼠模型.方法 利用锌指核酸酶(ZFN)技术,通过显微注射的方法将编码eNOS特异性锌指酶的mRNA注入SD大鼠受精卵并移植到同期受孕的S
【机 构】
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中国医科大学实验动物部,南京徇齐生物技术有限公司
【基金项目】
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国家科技重大项目;辽宁省科技计划项目
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目的 建立内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因敲除大鼠模型.方法 利用锌指核酸酶(ZFN)技术,通过显微注射的方法将编码eNOS特异性锌指酶的mRNA注入SD大鼠受精卵并移植到同期受孕的SD受体母鼠输卵管内.出生后仔鼠用PCR产物测序的方法鉴定基因型.对敲除大鼠进行外观观察,HE染色分析组织结构形态.通过Western blot分析敲除大鼠模型的心脏和肾脏组织中eNOS的表达情况.测量8～16周大鼠体质量,分析eNOS基因敲除对体质量的影响.采用尾套法测量大鼠心率、血压、收缩压和舒张压,比较与野生型大鼠的差异.结果 通过显微注射方法共注射441枚受精卵,存活365枚,分别移入12只SD大鼠输卵管,共产出23只F0代大鼠.PCR产物测序分析获得4只阳性原代大鼠,对8号大鼠筛选获得纯合子.阳性纯合子大鼠表现为肢体缺损,HE染色显示动脉血管结构形态异常.Western blot结果显示,eNOS敲除大鼠的心脏和肾脏组织中不表达eNOS蛋白.敲除大鼠的体质量明显低于野生型大鼠,体质量增长幅度慢.血压、收缩压、舒张压均高于野生型SD大鼠,有极显著差异(P＜0.01).eNOS敲除雌鼠心率低于野生型SD雌鼠(P＜0.05).eNOS敲除雄鼠心率与野生型SD雄鼠相比无统计学差异.结论 成功建立eNOS基因敲除大鼠模型,该模型或可成为高血压疾病研究的理想动物模型.
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