【摘 要】
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目的 探讨去除型人皮肤成纤维饲细胞系的建立及其重建角膜表层的相关研究.方法 将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、端粒酶逆转录酶(hTERT)和单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)3种基因
【机 构】
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南方医科大学深圳医院眼科 南方医科大学第三临床医学院, 广东省深圳市,518100;790-8577 日本爱媛县松山市,爱媛大学医学院眼科教研室;565-0871 日本大阪府吹田市,大阪大学医学院眼科
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目的 探讨去除型人皮肤成纤维饲细胞系的建立及其重建角膜表层的相关研究.方法 将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、端粒酶逆转录酶(hTERT)和单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)3种基因导入人皮肤成纤维细胞,建立荧光标记的永生化的可去除型TERT+TK-D人源饲细胞系.将创建的细胞系经丝裂霉素C处理后作为饲养细胞与人角膜缘干细胞共培养,并与3T3饲细胞的培养结果 作比较.结果 TERT+TK-D细胞系在体外经过6个月的连续传代后仍然表达绿色荧光蛋白,保持旺盛的分裂能力,对更昔洛韦敏感.TERT+TK-D组的克隆形成率(colony forming ef-ficiency,CFE)为(11.77±0.21)％,与3T3组CFE[(12.8±1.61)]％比较,差异无统计学意义(P=0.332);经过共培养,两组都形成了4～5层复层上皮细胞片.角膜缘干细胞克隆和上皮细胞片的免疫荧光染色及Real-time PCR定量分析结果 显示,TERT+TK-D组角蛋白K3表达低于3T3组;PCR结果 证实TERT+TK-D饲细胞在更昔洛韦作用下凋亡、裂解,没有混入培养获得的角膜上皮细胞片中.结论 转基因荧光标记的永生化的去除型人皮肤成纤维饲细胞有望替代3T3细胞用于角膜再生医疗.
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