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摘要：研究东方百合“甜梦”品种花器官的组织培养，为“甜梦”百合种球生产产业化提供技术支持。以“甜梦”花器官为外植体诱导愈伤组织，以MS添加不同浓度6-BA为愈伤组织分化培养基，MS添加不同浓度6.BA及NAA配比为诱导叶片产生不定芽的培养基，MS添加不同浓度糖为结鳞茎培养基，进行组织培养。结果表明：花器官不同部位诱导愈伤组织从易到难为：子房>花柱>花药>花托；愈伤组织分化以MS 6.BA 3.0 mg/L培养基较适宜；无菌叶片诱导不定芽以MS 6.BA 2.0 mg/L NAA 0.1 mg/L培养基为好；添加60 g/L糖的培养基利于不定芽结鳞茎生根；带鳞茎组培苗可直接移栽于大田菜园土。通过“甜梦”花器官的培养，得到可用于生产的组培苗，该技术可应用于“甜梦”百合种苗工厂化生产。
关键词：东方百合 “甜梦” 组织培养 花器官培养
百合（Lilium spp.）是百合科（Liliaceae）百合属（Lilium）多年生具地下鳞茎的草本植物，具有很高的观赏价值和经济价值。目前鲜花市场上流行的观赏百合有四大品系（铁炮系、亚洲系、东方系、L/A系），东方百合系列种植面积最大。“甜梦”属于东方百合的1个品种，其花色粉红，香气宜人，是近年进口花卉品种之一。百合组织培养中常用的方法是以百合鳞片作为外植体，用0.1%升汞溶液灭菌时间较长，而污染率相对较高。近年来以花器官为外植体进行培养的报道，主要以亚洲百合为主，花器官以花托、子房、花柱的分化率较高，较适宜的培养基是6-BA与NAA的配合使用。其次为东方百合，赵得萍对东方百合Sorbonne花器官进行的培养则花萼、花丝、花瓣均有较高的分化率。刘雅莉以Sorbonne花器官进行培养则直接诱导出不定芽。杨美纯等以“马可波罗”品种花器官为外植体，以花托诱导率为100%最高。王月等采用“梯伯”品种的再生植株嫩叶建立无性体系，张延龙则直接以“西西”品种叶片为外植体诱导愈伤组织，但诱导率不高。试验在前人的研究基础上，以东方百合“甜梦”花器官为外植体，建立其再生植株快速繁育体系，以期为百合的种苗工厂化生产充实理论依据。
1.材料与方法
1.1试验材料
东方百合“甜梦”品种花朵。
1.2试验方法
1.2.1灭菌及初代培养
选取花蕾和半开的花朵作为外植体进行灭菌。在超净工作台上将花蕾用75%酒精擦拭，0.1%HgCl2灭菌5 min；半开的花朵用洗衣粉溶液浸泡5min，自来水冲洗30 min，在超净工作台上用75%酒精灭菌50 s，0.1%HgCl2灭菌5 min，把灭菌过的外植体的花药、花托、柱头、子房等部位切开，分别接种于MS 6.BA 3.0 mg/L的培养基中诱导愈伤组织，6 d后统计污染数和死亡数。
1.2.2愈伤组织分化培养
把花器官各部分培养所获得的愈伤组织切成直径约0.6 cm的小块，接种于MS添加不同浓度6-BA（0-3.0 mg/L）的分化培养基中。30 d后统计分化出的不定芽数。
分化率=分化出不定芽的愈伤组织数/接种愈伤组织总数×100。
1.2.3不定芽叶片诱导分化培养
把由愈伤组织产生的不定芽叶片切成1 cm长度的小段，接种于培养基上，30 d后統计诱导率。
1.2.4不定芽结鳞茎及生根培养
选取生长健壮的单株不定芽接种到不同糖浓度的MS培养基中，30 d后统计生根、结鳞茎情况。
1.2.5组培苗移栽
选取具有根及鳞茎（直径1 cm左右）的组培苗移出培养室，在大棚炼苗3 d后，洗净培养基，分别种在大棚内沙床和室外菜地，每个处理种30株，1个月后统计成活数和新长出的根数。
1.3基本培养基及培养条件
基本培养基为MS，pH值5.8-6.0。光照强度2000-3000 Lx，光照时间为12-14 h/d，温度为26-28℃。
2.结果与分析
2.1花器官的培养
由表1可看出，经过不同方式的灭菌后，总体污染率大部分为0，只有花蕾有少量的污染。存活的花药培养13 d后开始膨大，之后慢慢变绿。花蕾的花托和子房在培养12 d后开始膨大，15 d后花柱也开始膨大，膨大后的子房颜色变绿。半开花朵的花器官培养中，子房比花蕾的子房推迟2 d膨大，有一端可观察到有5-6粒似胚状体小颗粒，柱头也开始膨大。在培养40 d之后，子房、花柱和花药均诱导出愈伤组织。花器官中以子房的诱导率最高，可达83.3%。
2.2 6-BA对愈伤组织分化的影响
由花器官诱导得到的愈伤组织经过多代增殖培养后，得到紧致、表面有绿色颗粒状的愈伤组织，接种于添加6-BA的分化培养基中。如表2所示，在6.BA人工激素的刺激下，愈伤组织的分化率最高达100.0%：在0-3.0 mg/L浓度之间，随着6.BA浓度的增大，愈伤组织分化率逐渐升高，且愈伤组织的分化率均高达70.0%以上；6-BA在3.0mg/L浓度时，平均每团愈伤组织分化出的不定芽数最多，有3.0个。在试验中也观察到，在愈伤组织分化中，一部分的不定芽基部直接形成鳞茎。
2.36-BA和NAA配比对诱导叶片分化不定芽的影响
由表3所示，在添加6.BA的处理中1.0-3.0mg/L各组的分化率均比CK高，以6.BA 2.5 mg/L处理的为最高，达50.0%；在6.BA和NAA配比的处理中，分化率相对较高，平均出芽数也相对较高，以6.BA 2.0 mg/L NAA 0.1 mg/L处理为最好，分化率达65.0%，平均出芽数为0.9个。在试验过程中发现，不定芽叶片基部比较容易分化出芽，叶片中部较少分化，叶片顶端则几乎不分化而死亡。因为接种叶片的部位是随机的，因此平均出芽数都相对较低。综合各方面的因素考虑，在无菌叶片的诱导分化中以MS 6.BA 2.0 mg/L NAA 0.1 mg/L的培养基为好。 2.4糖浓度对不定芽结鳞茎生根的影响
将不定芽接种到添加不同糖浓度培养基中，发现一定浓度的糖容易诱导百合不定芽基部膨大结鳞茎。含有低浓度糖的处理中，不定芽结鳞茎较少，只有一半可以结鳞茎；在糖浓度超过60 g/L的处理中不定芽结鳞茎多达80%左右，鳞茎最大直径可达1.2 cm。同时随着糖浓度的增高，不定芽生根率随之增大至100%，平均根数先升高后有所下降，其中以60 g/L糖浓度的培养基的生根率（100.0%）和平均根数（6.9条/个）达到最大值。综合不定芽结鳞茎和生根考虑，培养基以添加糖浓度60 g/L的MS培养基为宜。
2.5基质对带鳞茎的组培苗移栽的影响
已生根的百合鳞茎分别移栽在露天菜园土及大棚中按3：1沙床和土的混合基质中，隔1 d浇1次水，1周后施复合肥，1个月后统计其生长情况。由表5结果可看出，种于大棚混合基质中的鳞茎周径变小，成活率低，原先在培养基中生长的根都枯萎同时均无生长新根，可能是因为沙床营养不足，保水性差，鳞茎无法吸收足够的养分和水分，导致鳞茎萎缩，根活力降低。而种于菜园土的百合鳞茎移栽后周径有所增长，100%成活，重新长根的鳞茎高达90%以上，在试验观察中还发现，有些鳞茎已经开始生长新叶片，叶片肥厚浓绿。因此，“甜梦”组培鳞茎炼苗后可直接移栽于大田菜园土中。
3.讨论
刘丽敏采用不同百合花器官的不同部位进行组织培养，发现不同品种百合诱导愈伤组织的难易程度不同。试验中“甜梦”品种不同部位诱导愈伤组织从易到难为：子房>花柱>花药>花托。以花蕾或半开状态的花朵为外植体，比较容易灭菌，污染率低，可能因为花蕾或半开状态的花内部处于较封闭状态，杂菌很难进入。6-BA对愈伤组织的分化有较显著的效果，分化率最高达100%，鳞芽质量较好。以不定芽叶片切段进行再培养，可诱导不定芽分化，其中以叶片基部较容易诱导出芽和愈伤组织，这与王月的研究结果一致。采用此方式增加了百合组织培养的快速繁殖途径。诱导百合不定芽结鳞茎生根的方式有多种，王和飞的研究表明，基本培养基1/2 MS和MS对百合生根均有促进作用，生长素2，4-D、IBA、NAA均对百合鳞茎生根有显著的促进作用。而本试验选择不同糖浓度诱导“甜梦”不定芽结鳞茎生根有显著的效果。刘雅莉等选择珍珠岩、河沙、营养土等混合基质来移栽百合鳞茎，本试验则采用直接種植于大田菜园和沙与土按比例混合的基质，结果表明，“甜梦”组培鳞茎炼苗后可直接移栽于大田菜园土中，可能是因为菜园地能够提供充足的水分和养分，利于移栽鳞茎的吸收，从而利于百合鳞茎的成活和生长。“甜梦”带鳞茎的组培苗移栽大田适应性较强，在生产中可直接在大田种植。
4.结论
试验中“甜梦”品种花器官不同部位诱导愈伤组织从易到难为：子房>花柱>花药>花托。6-BA3.0 mg/L可直接作为诱导花器官产生愈伤组织的培养基，并对愈伤组织的分化有显著的诱导效果，分化率最高达100%，鳞芽质量较好。在无菌叶片诱导不定芽中以MS 6.BA 2.0 mg/L NAA 0.1 mg/L的培养基为好。不同糖浓度诱导不定芽结鳞茎最高达80%左右，鳞茎最大直径可达1.2 cm。生根率可达到75.0%以上，根青绿色，粗壮。试验可为“甜梦”百合品种的种苗工厂化生产充实理论依据。
关键词：东方百合 “甜梦” 组织培养 花器官培养
百合（Lilium spp.）是百合科（Liliaceae）百合属（Lilium）多年生具地下鳞茎的草本植物，具有很高的观赏价值和经济价值。目前鲜花市场上流行的观赏百合有四大品系（铁炮系、亚洲系、东方系、L/A系），东方百合系列种植面积最大。“甜梦”属于东方百合的1个品种，其花色粉红，香气宜人，是近年进口花卉品种之一。百合组织培养中常用的方法是以百合鳞片作为外植体，用0.1%升汞溶液灭菌时间较长，而污染率相对较高。近年来以花器官为外植体进行培养的报道，主要以亚洲百合为主，花器官以花托、子房、花柱的分化率较高，较适宜的培养基是6-BA与NAA的配合使用。其次为东方百合，赵得萍对东方百合Sorbonne花器官进行的培养则花萼、花丝、花瓣均有较高的分化率。刘雅莉以Sorbonne花器官进行培养则直接诱导出不定芽。杨美纯等以“马可波罗”品种花器官为外植体，以花托诱导率为100%最高。王月等采用“梯伯”品种的再生植株嫩叶建立无性体系，张延龙则直接以“西西”品种叶片为外植体诱导愈伤组织，但诱导率不高。试验在前人的研究基础上，以东方百合“甜梦”花器官为外植体，建立其再生植株快速繁育体系，以期为百合的种苗工厂化生产充实理论依据。
1.材料与方法
1.1试验材料
东方百合“甜梦”品种花朵。
1.2试验方法
1.2.1灭菌及初代培养
选取花蕾和半开的花朵作为外植体进行灭菌。在超净工作台上将花蕾用75%酒精擦拭，0.1%HgCl2灭菌5 min；半开的花朵用洗衣粉溶液浸泡5min，自来水冲洗30 min，在超净工作台上用75%酒精灭菌50 s，0.1%HgCl2灭菌5 min，把灭菌过的外植体的花药、花托、柱头、子房等部位切开，分别接种于MS 6.BA 3.0 mg/L的培养基中诱导愈伤组织，6 d后统计污染数和死亡数。
1.2.2愈伤组织分化培养
把花器官各部分培养所获得的愈伤组织切成直径约0.6 cm的小块，接种于MS添加不同浓度6-BA（0-3.0 mg/L）的分化培养基中。30 d后统计分化出的不定芽数。
分化率=分化出不定芽的愈伤组织数/接种愈伤组织总数×100。
1.2.3不定芽叶片诱导分化培养
把由愈伤组织产生的不定芽叶片切成1 cm长度的小段，接种于培养基上，30 d后統计诱导率。
1.2.4不定芽结鳞茎及生根培养
选取生长健壮的单株不定芽接种到不同糖浓度的MS培养基中，30 d后统计生根、结鳞茎情况。
1.2.5组培苗移栽
选取具有根及鳞茎（直径1 cm左右）的组培苗移出培养室，在大棚炼苗3 d后，洗净培养基，分别种在大棚内沙床和室外菜地，每个处理种30株，1个月后统计成活数和新长出的根数。
1.3基本培养基及培养条件
基本培养基为MS，pH值5.8-6.0。光照强度2000-3000 Lx，光照时间为12-14 h/d，温度为26-28℃。
2.结果与分析
2.1花器官的培养
由表1可看出，经过不同方式的灭菌后，总体污染率大部分为0，只有花蕾有少量的污染。存活的花药培养13 d后开始膨大，之后慢慢变绿。花蕾的花托和子房在培养12 d后开始膨大，15 d后花柱也开始膨大，膨大后的子房颜色变绿。半开花朵的花器官培养中，子房比花蕾的子房推迟2 d膨大，有一端可观察到有5-6粒似胚状体小颗粒，柱头也开始膨大。在培养40 d之后，子房、花柱和花药均诱导出愈伤组织。花器官中以子房的诱导率最高，可达83.3%。
2.2 6-BA对愈伤组织分化的影响
由花器官诱导得到的愈伤组织经过多代增殖培养后，得到紧致、表面有绿色颗粒状的愈伤组织，接种于添加6-BA的分化培养基中。如表2所示，在6.BA人工激素的刺激下，愈伤组织的分化率最高达100.0%：在0-3.0 mg/L浓度之间，随着6.BA浓度的增大，愈伤组织分化率逐渐升高，且愈伤组织的分化率均高达70.0%以上；6-BA在3.0mg/L浓度时，平均每团愈伤组织分化出的不定芽数最多，有3.0个。在试验中也观察到，在愈伤组织分化中，一部分的不定芽基部直接形成鳞茎。
2.36-BA和NAA配比对诱导叶片分化不定芽的影响
由表3所示，在添加6.BA的处理中1.0-3.0mg/L各组的分化率均比CK高，以6.BA 2.5 mg/L处理的为最高，达50.0%；在6.BA和NAA配比的处理中，分化率相对较高，平均出芽数也相对较高，以6.BA 2.0 mg/L NAA 0.1 mg/L处理为最好，分化率达65.0%，平均出芽数为0.9个。在试验过程中发现，不定芽叶片基部比较容易分化出芽，叶片中部较少分化，叶片顶端则几乎不分化而死亡。因为接种叶片的部位是随机的，因此平均出芽数都相对较低。综合各方面的因素考虑，在无菌叶片的诱导分化中以MS 6.BA 2.0 mg/L NAA 0.1 mg/L的培养基为好。 2.4糖浓度对不定芽结鳞茎生根的影响
将不定芽接种到添加不同糖浓度培养基中，发现一定浓度的糖容易诱导百合不定芽基部膨大结鳞茎。含有低浓度糖的处理中，不定芽结鳞茎较少，只有一半可以结鳞茎；在糖浓度超过60 g/L的处理中不定芽结鳞茎多达80%左右，鳞茎最大直径可达1.2 cm。同时随着糖浓度的增高，不定芽生根率随之增大至100%，平均根数先升高后有所下降，其中以60 g/L糖浓度的培养基的生根率（100.0%）和平均根数（6.9条/个）达到最大值。综合不定芽结鳞茎和生根考虑，培养基以添加糖浓度60 g/L的MS培养基为宜。
2.5基质对带鳞茎的组培苗移栽的影响
已生根的百合鳞茎分别移栽在露天菜园土及大棚中按3：1沙床和土的混合基质中，隔1 d浇1次水，1周后施复合肥，1个月后统计其生长情况。由表5结果可看出，种于大棚混合基质中的鳞茎周径变小，成活率低，原先在培养基中生长的根都枯萎同时均无生长新根，可能是因为沙床营养不足，保水性差，鳞茎无法吸收足够的养分和水分，导致鳞茎萎缩，根活力降低。而种于菜园土的百合鳞茎移栽后周径有所增长，100%成活，重新长根的鳞茎高达90%以上，在试验观察中还发现，有些鳞茎已经开始生长新叶片，叶片肥厚浓绿。因此，“甜梦”组培鳞茎炼苗后可直接移栽于大田菜园土中。
3.讨论
刘丽敏采用不同百合花器官的不同部位进行组织培养，发现不同品种百合诱导愈伤组织的难易程度不同。试验中“甜梦”品种不同部位诱导愈伤组织从易到难为：子房>花柱>花药>花托。以花蕾或半开状态的花朵为外植体，比较容易灭菌，污染率低，可能因为花蕾或半开状态的花内部处于较封闭状态，杂菌很难进入。6-BA对愈伤组织的分化有较显著的效果，分化率最高达100%，鳞芽质量较好。以不定芽叶片切段进行再培养，可诱导不定芽分化，其中以叶片基部较容易诱导出芽和愈伤组织，这与王月的研究结果一致。采用此方式增加了百合组织培养的快速繁殖途径。诱导百合不定芽结鳞茎生根的方式有多种，王和飞的研究表明，基本培养基1/2 MS和MS对百合生根均有促进作用，生长素2，4-D、IBA、NAA均对百合鳞茎生根有显著的促进作用。而本试验选择不同糖浓度诱导“甜梦”不定芽结鳞茎生根有显著的效果。刘雅莉等选择珍珠岩、河沙、营养土等混合基质来移栽百合鳞茎，本试验则采用直接種植于大田菜园和沙与土按比例混合的基质，结果表明，“甜梦”组培鳞茎炼苗后可直接移栽于大田菜园土中，可能是因为菜园地能够提供充足的水分和养分，利于移栽鳞茎的吸收，从而利于百合鳞茎的成活和生长。“甜梦”带鳞茎的组培苗移栽大田适应性较强，在生产中可直接在大田种植。
4.结论
试验中“甜梦”品种花器官不同部位诱导愈伤组织从易到难为：子房>花柱>花药>花托。6-BA3.0 mg/L可直接作为诱导花器官产生愈伤组织的培养基，并对愈伤组织的分化有显著的诱导效果，分化率最高达100%，鳞芽质量较好。在无菌叶片诱导不定芽中以MS 6.BA 2.0 mg/L NAA 0.1 mg/L的培养基为好。不同糖浓度诱导不定芽结鳞茎最高达80%左右，鳞茎最大直径可达1.2 cm。生根率可达到75.0%以上，根青绿色，粗壮。试验可为“甜梦”百合品种的种苗工厂化生产充实理论依据。