【摘 要】
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目的 筛选氯菊酯人源单链可变区(scFv)抗体,为研究快速检测试剂盒奠定基础.方法 采用噬菌体表面展示技术,以氯菊酯作为抗原,固相包被于Nunc板,应用半合成的人源单链可变区抗
【机 构】
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中国人民解放军海军总医院血液科,中国人民解放军军事医学科学院十所
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目的 筛选氯菊酯人源单链可变区(scFv)抗体,为研究快速检测试剂盒奠定基础.方法 采用噬菌体表面展示技术,以氯菊酯作为抗原,固相包被于Nunc板,应用半合成的人源单链可变区抗体文库技术,从噬菌体单链可变区抗体库中经过3轮"吸附-洗脱-扩增"筛选过程,随机挑选抗氯菊酯的100个克隆,利用酶联免疫吸附法(ELISA)、交叉反应及竞争抑制实验,对其进行免疫学检测和鉴定,获得与氯菊酯结合活性较强的scFv阳性克隆,从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒,经酶切鉴定Sfi Ⅰ/Not Ⅰ后,亚克隆到pCANTAB5E载体;转化大肠杆菌XL1-Blue,提取质粒进行酶切鉴定分析.结果 经过筛选100个克隆中有18株克隆ELISA的吸光度(A值)-490 nm波长(A490nm)值较高,将这些噬菌体上清与牛血清白蛋白(BSA)进行交叉反应,确定有5株交叉反应较弱,结合3次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,最后确定1株阳性克隆.亚克隆到pCANTAB5E载体;转化感受态细胞XL1-Blue.结论 提取质粒酶切片段与目的相符;为下一步其特异性亲和力的研究创造了条件.
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