【摘 要】
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目的 通过体内外实验探讨PI3K/Akt信号对腹膜透析腹膜间皮细胞上皮-间充质转分化(EMT)的调节作用.方法 40只12周龄ICR小鼠腹腔置管行腹膜透析,制备腹膜间皮细胞的上皮-间充质EMT小鼠模型,成膜后分为PD模型组和对照组.采用实时定量PCR、Western印迹和组织免疫荧光等方法检测腹膜组织磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(pAkt)的表达及EMT相关蛋白和mRNA的表达[包括紧密连接蛋白(ZO
【机 构】
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广东省暨南大学附属清远人民医院肾内科,410011长沙,中南大学湘雅二医院肾内科中南大学肾脏病研究所湖南省血液净化与肾脏病重点实验室,410011长沙,中南大学湘雅二医院肾内科中南大学肾脏病研究所湖南
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目的 通过体内外实验探讨PI3K/Akt信号对腹膜透析腹膜间皮细胞上皮-间充质转分化(EMT)的调节作用.方法 40只12周龄ICR小鼠腹腔置管行腹膜透析,制备腹膜间皮细胞的上皮-间充质EMT小鼠模型,成膜后分为PD模型组和对照组.采用实时定量PCR、Western印迹和组织免疫荧光等方法检测腹膜组织磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(pAkt)的表达及EMT相关蛋白和mRNA的表达[包括紧密连接蛋白(ZO-1)、波形蛋白(Vimentin)、纤连蛋白(FN)].体外实验观察转化生长因子(TGF)β1对人腹膜间皮细胞(HPMCs) Akt磷酸化和核转位及ZO-1、Vimentin表达的影响.采用PI3K/Akt抑制剂LY294002预处理和负显性Akt(DN-Akt)质粒转染HPMCs,抑制P13K/Akt信号,观察其对TGF-β1诱导的HPMCs细胞ZO-1、Vimentin表达的影响.结果 与对照组相比,模型组小鼠第28天壁层腹膜组织明显增厚,上皮细胞标志物ZO-1 mRNA和蛋白表达降低,间充质细胞标志物Vimentin和FN的mRNA和蛋白表达升高,Akt磷酸化水平(pAkt)也明显升高(均P＜0.01).体外实验发现:TGF-βl抑制HPMCs细胞ZO-1表达,增加Vimentin和pAkt表达(均P＜0.01),且呈浓度依赖性;LY294002、DN-Akt处理可抑制pAkt表达,对TGF-β1诱导的HPMCs ZO-1 mRNA和蛋白下调表达有明显回复作用,并抑制TGF-β1引起的Vimentin mRNA和蛋白的高表达(均P＜ 0.01).结论 PI3K/Akt信号参与调节PD腹膜间皮细胞EMT,以PI3K/Akt信号为靶点可望为腹膜纤维化的防治提供一种新途径。
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