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目的：验证Nemo样激酶（ NLK）与Smad4之间的相互作用并探讨NLK对Smad4功能的影响。方法应用免疫共沉淀和谷胱甘肽硫基转移酶（ GST）沉降技术检测NLK与Smad4之间相互作用，GST沉降技术确定Smad4与NLK相互作用的结构域，荧光素酶报告基因实验检测NLK及NLK激酶活性突变体-NLK（ KM）对Smad4转录活性的影响，体内磷酸化实验检测NLK对Smad4磷酸化的影响。结果免疫共沉淀和GST沉降的结果显示，NLK与Smad4在体内和体外存在相互作用。 GST沉降的结果显示Smad4通过MH2结构域与NLK结合。荧光素酶报告基因实验的结果显示，NLK和NLK（ KM）均可抑制Smad4的转录活性，且抑制程度相同。体内磷酸化的结果显示， NLK不能磷酸化Smad4。结论 NLK与Smad4相互作用，以激酶非依赖的方式抑制Smad4的转录活性，NLK抑制Smad4的分子机制有待进一步探讨。