【摘 要】
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目的 探讨重组人脱氧核糖核酸酶(rhDNase)抑制冻存复苏脐血干细胞微凝集及凝块形成的作用.方法 分别将冻存2周、1个月、2个月、半年、1年及2年的脐血干细胞进行复苏,然后用不同浓度(终浓度分别为0、1、5、8、10、20及50 U/ml)的rhDNase缓冲液进行洗涤,在显微镜下观察凝块及微凝集的形成情况.采用免疫磁珠法分选CD34+细胞,分别经10 U/ml和50 U/ml的rhDNase缓
【机 构】
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目的 探讨重组人脱氧核糖核酸酶(rhDNase)抑制冻存复苏脐血干细胞微凝集及凝块形成的作用.方法 分别将冻存2周、1个月、2个月、半年、1年及2年的脐血干细胞进行复苏,然后用不同浓度(终浓度分别为0、1、5、8、10、20及50 U/ml)的rhDNase缓冲液进行洗涤,在显微镜下观察凝块及微凝集的形成情况.采用免疫磁珠法分选CD34+细胞,分别经10 U/ml和50 U/ml的rhDNase缓冲液处理,采用免疫荧光直接四色标记和流式细胞术检测CD34+细胞表面CD54、CD11a、CD62L的表达;采用自动血细胞分析仪测定细胞回收率,台盼蓝着色法判断细胞活性,分析10 U/mlrhDNase缓冲液洗涤对复苏脐血细胞回收率、细胞活性及凝集率的影响.结果 复苏的脐血干细胞经0、1、5、8 U/ml的rhDNase缓冲液洗涤后仍有不同程度的凝集;经浓度为10、20、50 U/ml的rhDNase缓冲液处理后,没有出现凝块和微凝集.经10 U/ml及50 U/ml的rhDNase处理后,CD34+细胞表面粘附分子的表达无明显改变,与阴性对照相比,差异无统计学意义.经10 U/ml的rhDNase缓冲液洗涤后,干细胞回收率有所下降(P＜0.05),但对细胞活性无明显影响,未经洗涤的脐血均有凝集,而洗后均无凝集.结论 浓度为10 U/ml的rhDNase足以抑制复苏后脐血干细胞凝块和微凝集的形成,且不影响脐血干细胞的活性及粘附分子的表达。
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