【摘 要】
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提取B95-8细胞RNA,进行逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增BARF1基因,将其克隆到pUM-T载体,转化E.coli DH5α.筛选阳性克隆,
【机 构】
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河北联合大学,生物科学系,河北,唐山,063000中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所肿瘤病毒室,传染病预防控制国家重点实验室病毒性肿瘤组,北京,100052;
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提取B95-8细胞RNA,进行逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增BARF1基因,将其克隆到pUM-T载体,转化E.coli DH5α.筛选阳性克隆,提取质粒并用EcoRI和BamHI双酶切,电泳回收BARF1片段.同时用EcoRI和BamHI双酶切真核载体PIRES2-EGFP,电泳后回收载体PIRES2-EGFP并与BARF1片段连接;转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆.提取质粒并用EcoRI和BamHI双酶切鉴定插入方向,并进行测序分析.转染胃上皮细服GES-1后,观察细胞形态与行为变化.得到666 by的BARF1基因片段.经双酶切鉴定,BARF1基因已正确连接到PIRES2-EGFP真核表达载体;侧序结果与B95-8细胞株序列完全一致.BARF1基因转染GES-1细胞后,细胞由梭形圆化,黏着力减弱,重叠生长.结果表明成功地构建了携带EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)编码BARF1基因的真核表达载体.
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