【摘 要】
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【目的】采用RNA干扰(RNAi)技术阻断类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)基因的表达,探讨uPAR基因沉默后对RA-FLS功能产生的影响及有关
【机 构】
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中山大学附属第三医院风湿免疫科,广东省第二人民医院风湿免疫科
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【目的】采用RNA干扰(RNAi)技术阻断类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)基因的表达,探讨uPAR基因沉默后对RA-FLS功能产生的影响及有关机制。【方法】收集行关节置换术或滑膜清理术的RA患者的滑膜组织,组织块法培养RA-FLS。通过阳离子脂质体转染的方法,转染体外合成的特异性uPARsiRNA;利用荧光定量PCR法和Western blotting法检测uPAR沉默效果;CCK8法检测细胞增殖抑制率;流式细胞技术检测细胞周期改变;Transwell趋化小室测定细胞的迁移能力;Western blotting技术分析沉默uPAR基因对RA-FLS中PI3K/AKT通路的影响。【结果】uPAR-siRNA能有效阻断RA-FLS中uPAR基因在mRNA和蛋白水平上的表达。沉默uPAR基因后,细胞48、72、96 h增殖抑制率分别为(17.51±2.27)%、(28.62±4.82)%、(22.91±5.78)%,显著高于对照组(P<0.05);uPARsiRNA干扰后,被阻滞于G0/G1期的细胞增加,而S和G2/M期的细胞减少;Transwell趋化小室结果显示:与对照组相比,特异性干扰组的RA-FLS迁移细胞数(35±11)相比空白对照组(138±21)和NC-siRNA组(136±19)明显减少(P<0.05);转染后的RA-FLS相对于对照组,PI3K、AKT、GSK3β的磷酸化水平显著降低(P<0.05)。【结论】uPAR在RA-FLS的增殖、周期及迁移中起重要作用,这可能与其对PI3KAKT通路的激活有关。
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