【摘 要】
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目的 研究体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化过程中相关调控基因的时序表达,筛选MSCs定向分化为心肌细胞的重要调控基因.方法采用第8代的MSCs,以去甲基化药物5-氮杂胞苷进行体外诱导,连续观察8周,相差显微镜下观察其形态变化,荧光免疫组化方法鉴定心肌特征性蛋白肌球蛋白重链(MHC)和连接蛋白Connexin43的表达,应用半定量RT-PCR技术分析TGF-β、Nkx-2.5、G
【机 构】
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400014,重庆医科大学儿童医院心内科,400014,重庆医科大学儿童医院心内科,400014,重庆医科大学儿童医院心内科,400014,重庆医科大学儿童医院心内科,400014,重庆医科大学儿童医
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目的 研究体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化过程中相关调控基因的时序表达,筛选MSCs定向分化为心肌细胞的重要调控基因.方法采用第8代的MSCs,以去甲基化药物5-氮杂胞苷进行体外诱导,连续观察8周,相差显微镜下观察其形态变化,荧光免疫组化方法鉴定心肌特征性蛋白肌球蛋白重链(MHC)和连接蛋白Connexin43的表达,应用半定量RT-PCR技术分析TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C、TEF-1和RARα等相关调控基因在分化过程中的动态时序表达.结果诱导前MSCs呈成纤维细胞样,诱导后细胞形态发生变化,1周呈棒状或球形,2周后细胞之间形成连接,排列方向渐趋一致,3周时开始出现肌管结构.MHC诱导前无表达,诱导后1周开始表达,2周起表达逐渐增强,8周时阳性细胞比例为30%;Connexin43在诱导前有弱表达,阳性率为5%,诱导后逐渐增强,8周时阳性细胞比例为40%.TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4和MEF-2C基因在诱导后1天表达开始增强,诱导后1周达高峰,以后维持在高水平;TEF-1和RARα基因在诱导过程中表达无明显变化.结论 TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4和MEF-2C可能是调控MSCs定向分化为心肌样细胞的重要调控基因。
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