人p53不同突变体的构建、表达及其对亚砷酸盐诱导细胞凋亡的影响

来源 :南方医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：zxi666

【摘要】

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目的构建人p53的不同突变体，并在真核细胞中表达，研究这些突变体对应激刺激诱导细胞凋亡的影响。方法采用PCR方法扩增人p53cDNA序列，使用常规酶切、连接方法将其重组至pcDNA3／HA

【作者】

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刘爱华龚小卫魏洁明小燕王达安邓鹏罗深秋姜勇

【机构】

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南方医科大学南方医院呼吸科,南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室,南方医科大学细胞生物学教研室

【出处】

：

南方医科大学学报

【发表日期】

：

2008年5期

【关键词】

：

P53 定点突变载体构建基因表达细胞凋亡亚砷酸盐 p53 site-directed mutagenesis vector construction g

【基金项目】

：

国家自然科学基金（30572151）,国家自然科学基金委员会-广东省人民政府自然科学联合基金（U0632004）,广东省自然科学基金（05004730）.

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目的构建人p53的不同突变体，并在真核细胞中表达，研究这些突变体对应激刺激诱导细胞凋亡的影响。方法采用PCR方法扩增人p53cDNA序列，使用常规酶切、连接方法将其重组至pcDNA3／HA载体中，对阳性克隆进行酶切和PCR鉴定。将阳性重组体的第15位和第46位丝氨酸突变为丙氨酸，并转染NIH3T3细胞，观察其在NIH3T3细胞内的表达情况。转染不同突变体的NIH3T3细胞用AnnexinV．FITC和碘化丙啶双标后，利用流式细胞术检测亚砷酸盐刺激前后的凋亡情况。结果构建的pcDNA3／H—p53（WT）、

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