【摘 要】
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目的:开发一种对α-玉米赤霉烯醇(α-zearalenol,α-ZOL)催化活性高的水解酶,以促进玉米赤霉烯酮的酶法完全脱毒,推动玉米赤霉烯酮降解酶在饲料业和畜牧业的应用.方法:在NCBI数据库中通过基因挖掘获得一个来源于Exophiala aquamarina CBS 119918的新型玉米赤霉烯酮水解酶EaZHD,基因全长792 bp.构建重组质粒pET46-Eazhd,并在大肠杆菌中成功表达.经Ni-NTA亲和层析和DEAE阴离子交换柱纯化后,利用HPLC测定残余底物浓度的方法来表征其酶学性质.结果
【机 构】
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天津科技大学生物工程学院 工业微生物教育部重点实验室 天津 300457;中国科学院天津工业生物技术研究所 天津 300308;中国科学院天津工业生物技术研究所 天津 300308;天津科技大学生物工
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目的:开发一种对α-玉米赤霉烯醇(α-zearalenol,α-ZOL)催化活性高的水解酶,以促进玉米赤霉烯酮的酶法完全脱毒,推动玉米赤霉烯酮降解酶在饲料业和畜牧业的应用.方法:在NCBI数据库中通过基因挖掘获得一个来源于Exophiala aquamarina CBS 119918的新型玉米赤霉烯酮水解酶EaZHD,基因全长792 bp.构建重组质粒pET46-Eazhd,并在大肠杆菌中成功表达.经Ni-NTA亲和层析和DEAE阴离子交换柱纯化后,利用HPLC测定残余底物浓度的方法来表征其酶学性质.结果:EaZHD对玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)的酶活力为0.764 U/mg,而对α-ZOL的酶活力为1.529 U/mg,是对底物ZEN降解活力的2倍.EaZHD在pH 8.6和温度40℃条件下的活性最高,并具有较好的热稳定性和碱性条件下较高的pH稳定性.通过对EaZHD活性中心附近的氨基酸进行突变和活性分析,确定了对催化活性起关键作用的三个氨基酸,以及对底物特异性有影响的两个关键氨基酸.结论:为推动饲料业和畜牧业中玉米赤霉烯酮的酶法脱毒奠定了基础.
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