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通过检测新型雌激素受体(ERα36)基因沉默后PC12高分化细胞中生长相关蛋白的表达,探讨ERα36对PC12细胞生长增殖的影响。
方法利用ERα36-shRNA质粒转染细胞建立ERα36基因沉默细胞模型(PC12-36L1,PC12-36L2),免疫细胞荧光法检测ERα36的表达,Western blot检测PC12细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)等生长相关蛋白的表达变化。
结果①三个细胞株PC12-36C1(转染空质粒)、PC12-36L1和PC12-36L2中均有ERα36表达;与PC12-36C1、PC12-36L2细胞相比(OD值分别为:0.95±0.05,0.78±0.10),PC12-36L1细胞内ERα36表达显著降低(OD值:0.47±0.12,P<0.01)。②与PC12和PC12-36C1细胞相比,PC12-36L1细胞中PCNA、CyclinD1和p-MAPK的表达都显著升高(P<0.01)[PCNA、CyclinD1和p-MAPK的OD值:PC12细胞分别为(1.00±0.05,1.00±0.11,1.00±0.05),PC12-36C1细胞分别为(1.09±0.15,0.92±0.23,1.12±0.08),PC12-36L1细胞分别为(1.74±0.12,2.20±0.25,1.77±0.06)]。
结论ERα36基因沉默可促进PC12细胞的生长增殖。结果提示ERα36低表达可能与脑瘤等神经系统疾病有关。