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摘要 目的:观察慢性疲劳大鼠的行为学变化及研究针刺其背俞穴的治疗作用。方法:运用慢性束缚及强制冰冷水游泳复合刺激因素造模,并根据背俞穴的特异性选取肺俞、心俞、肝俞、脾俞、肾俞等穴进行针刺治疗干预,以艾灸和人参皂甙灌胃进行对比,用旷场实验和鼠尾悬挂实验进行观测评定。结果:模型组大鼠活动能力下降,情绪有抑郁倾向等疲劳症状,针刺、艾灸背俞穴和灌服人参皂甙均能改善各项评测成绩。结论:针刺背俞穴能有效改善模型大鼠由慢性疲劳所带来的体力和精神上的症状。
关键词 背俞穴 慢性疲劳 行为学
随着当代社会生活节奏的加快,临床上以精神紧张、容易疲劳为主诉的患者越来越多,慢性疲劳综合征(chronic fatigue syndmme,CFS)日益受到医学界的重视。CFS虽一时危及不到生命,但会严重影响患者的健康及生活质量。它带给患者的不仅仅是生理疲劳,更多的是心理上的变化,将降低机体对外环境的兴奋性及应激性。针灸作为祖国医学重要的传统疗法之一,在临床上治疗慢性疲劳综合征已经取得了较好的疗效,也广泛的被患者所肯定。本实验通过针刺慢性疲劳模型大鼠背俞穴,观察研究其对慢性疲劳模型大鼠行为学上的变化与影响,为优化临床针灸治疗CFS提供新的思路。
1 材料与方法
1.1 实验动物与分组雄性3月龄SPF级SD大鼠60只,体重160-180g,雌雄各半。根据随机数字表法将大鼠随机分为正常空白组(Ⅰ组)、模型组(Ⅱ组)、针刺组(Ⅲ组)、艾灸组(Ⅳ组)和药物组(Ⅴ组),每组雌雄大鼠各6只。
1.2 动物模型建立大鼠饲养于室温22±2℃正常光照的SPF级实验室中,同组雌雄分开。适应2天后进行造模。除空白组(I组)不作造模处理外其余各组均采用慢性束缚法和强制冰冷水游泳法隔天交替进行制备CFS大鼠模型,规定单号日期进行束缚,双号日期进行冷水游泳,持续14天。
慢性束缚法:将需造模的三组大鼠均隔天束缚1次,每次束缚过程四组同步进行,但每天束缚的时间不同,随机确定(每天上午8-11点,或下午2:30-5:30)。每次束缚时,使大鼠钻进自制的束缚筒内(大小以可以装进实验大鼠但不能使其挣扎转头为宜),并调节到其不产生强烈反抗的紧张程度,平架在木板上。6min后取出。在整个束缚过程中,正常组动物在同一环境中,但不予进食和进水。
强制冰冷水游泳法:准备两个游泳池,规格为185cm×58cm×73cm,游泳时水深为50em,水温为10℃±I℃,将同组雌雄大鼠同时分别置于游泳池,10分钟后取出。游泳期间防止大鼠团抱自救或因力竭沉入水中。
1.3 治疗处理各组均在每天造模处理后05h内开始进行治疗处理,每日1次,连续14天。
正常空白组(Ⅰ组)、模型组(Ⅱ组):不进行任何治疗处理;
针刺组(Ⅲ组):针刺治疗,针刺方法为:依据中国中医药出版社出版的《针灸治疗学》慢性疲劳综合征一节,同样选穴肺俞、心俞、肝俞、脾俞、肾俞,参照《实验针灸学》定位。第一组穴位选择肺俞、心俞;第二组穴位选择肝俞、脾俞、肾俞。针刺前先用苦味酸标记以上穴位,然后将大鼠放在自制的铁丝固定笼中,调整笼的大小,以不产生运动为准。两组穴位每日交替选用,采用江苏医疗器械厂生产的0.15寸30号毫针,直刺5～9mm,针刺手法采用捻转补法,留针30min,每5min行针1次;
艾灸组(Ⅳ组):艾灸治疗,选取针刺组同样的穴位,将大鼠固定后以无烟艾条点燃置于穴位上2—3cm处,每穴每次灸10min,两组穴隔天交替进行。
药物组(Ⅴ组):人参皂甙灌胃治疗,人参皂甙粉剂由广州威佳生物化学试剂公司提治疗。本组模型大鼠给予人参皂甙水溶液(70mg/kg/d)灌胃治疗。
1.4 行为学测试方法14天后,造模与治疗结束,立即开始行为学方面的测定。内容包括探究行为及情绪反应(旷场实验)和体力情况及疲劳的程度(鼠尾悬挂实验)。
旷场实验(Open-field法):(参考Katz方法)用于测定大鼠的探究活动和情绪反应。将大鼠置于敞箱底面的中心方格内,以动物穿越底面的格数(四爪均进入的方格方可记数)记录为水平运动次数,以后肢直立次数(两前爪腾空或攀附箱壁)记录为垂直运动次数。室内暗光,安静,每次实验后均将粪便尿液清除干净。每只动物测定1次,每次测定3min。穿行次数少于10次的将不纳入统计。
鼠尾悬挂实验:用于测定大鼠体力情况及疲劳的程度。具体操作为将距大鼠尾端1cm的部分穿过中央钻有直径1cm的孔的一水平有机玻璃板,板离地面1m左右,使大鼠呈倒挂状。大鼠为克服不正常的体位而挣扎活动,但活动一定时间后,出现间断性“不动”,显示“失望”状态。观察5min内大鼠的不动时间(处于完全静止不动状态的总时间1。
1.5 数据的处理采用SPSS18.0统计软件处理。实验结果均以平均值±标准差(X±s)表示,组间差异采用方差分析,用Duncan’s检验。
2 结果
2.1 旷场实验由表1可知,正常组、针刺组、艾灸组与药物组的穿行次数明显多于模型组,差异具有统计学意义,除模型组外各组无明显差异。模型组直立次数的均数少于正常组,但差异不具有统计学意义(考虑实验环境影响);针刺组、艾灸组、药物组的直立次数要多于模型组,差异具有统计学意义。
2.2 鼠尾悬挂实验由表2可知,正常组、针刺组、艾灸组与药物组的不动时间明显少于模型组,差异具有统计学意义,除模型组外各组无明显差异,但艾灸组的不动时间最短。
3 分析与讨论
大量的临床病例及研究证实,CFS发病后,除常见的体力疲劳症状外,常伴有精神抑郁或急躁、健忘等精神神经症状。祖国医学虽无CFS病名之说,但其与古人记载的某些病症在病因、病机、症状乃至治疗都与CFS有相似之处,如张仲景在《金匮要略》中的百合病、脏躁病,李东垣在《脾胃论》中所论的脾胃内伤病。中医认为,CFS病位以肝、脾、肾为主,尤以肝为要,由于积劳内伤或病后久虚不复,脏腑生理功能不相协调,与心、肺、肝、脾、肾五脏的气血、阴阳失调相关。
在旷场实验中,模型组大鼠的穿行次数、直立次数都明显少于正常组,可以看出CFS降低了大鼠的空间探究能力及其对陌生环境的好奇性,有抑郁的倾向。鼠尾悬挂实验中大鼠的不动时间也明显要多于其余各组,说明模型组大鼠经造模后体力下降明显,活动易出现疲劳。
针刺组及艾灸组中,我们根据CFS的病因病机,参考教科书,制定了肺俞、心俞、肝俞、脾俞、肾俞这一组主治穴位。背俞穴是脏腑之气输注于背部膀胱经上的俞穴,与体内脏腑相连系,可以直接调理各脏腑功能失调。肺俞补气行气,心俞调神定志,肝俞、脾俞两穴配合调肝补脾,以解气机之郁滞、复脾胃之升降,肾俞调补真元。各穴共同行气补虚,调补肝脾,调心安神,以恢复五脏功能协调,解除机体疲劳。而药物组,据前人研究,人参皂甙可以通过抑制羟、氧自由基产生、过氧化氢的脂质过氧化作用及加速自由基清楚等途径发挥抗氧自由基的作用,从而起到缓解疲劳的作用。各治疗组的CFS大鼠经相应的治疗后,旷场实验和鼠尾悬挂实验的结果均好于模型组,疲劳症状明显改善,据统计分析差异具有统计学意义。证明以背俞穴为主穴治疗CFS无论是针刺还是艾灸均能取得良好效果,选取背俞穴为主穴直接调理脏腑以治疗CFS的思路值得研究和推广。本次实验未能体现出各治疗组间的治疗效果的明显差异(各治疗组的结果差异不具统计学意义),考虑为实验设计方案的不足,本次实验的重点也不在此。
参考文献
[1]Holmes Cp,Kaplan J.E,et a1.Recent developments in chronic fatigue.Ann In Med,1988;108:387
[2]罗英华,陈敏聪,冯耀华,等.针刺对慢性疲劳大鼠血清IL-2及TNF-α的影响[J],天津中医药,2006,23(3):206-208
[3]王天芳,陈易新,季绍良,等.慢性疲劳动物模型的研制及其行为学观察[J],中国中医基础医学杂志,1999,5(5):25
[4]赵文历,张立实,贾旭东,等.人参皂甙抗疲劳作用的研究进展.中国食品卫生杂志,2008,20(5):445—448
关键词 背俞穴 慢性疲劳 行为学
随着当代社会生活节奏的加快,临床上以精神紧张、容易疲劳为主诉的患者越来越多,慢性疲劳综合征(chronic fatigue syndmme,CFS)日益受到医学界的重视。CFS虽一时危及不到生命,但会严重影响患者的健康及生活质量。它带给患者的不仅仅是生理疲劳,更多的是心理上的变化,将降低机体对外环境的兴奋性及应激性。针灸作为祖国医学重要的传统疗法之一,在临床上治疗慢性疲劳综合征已经取得了较好的疗效,也广泛的被患者所肯定。本实验通过针刺慢性疲劳模型大鼠背俞穴,观察研究其对慢性疲劳模型大鼠行为学上的变化与影响,为优化临床针灸治疗CFS提供新的思路。
1 材料与方法
1.1 实验动物与分组雄性3月龄SPF级SD大鼠60只,体重160-180g,雌雄各半。根据随机数字表法将大鼠随机分为正常空白组(Ⅰ组)、模型组(Ⅱ组)、针刺组(Ⅲ组)、艾灸组(Ⅳ组)和药物组(Ⅴ组),每组雌雄大鼠各6只。
1.2 动物模型建立大鼠饲养于室温22±2℃正常光照的SPF级实验室中,同组雌雄分开。适应2天后进行造模。除空白组(I组)不作造模处理外其余各组均采用慢性束缚法和强制冰冷水游泳法隔天交替进行制备CFS大鼠模型,规定单号日期进行束缚,双号日期进行冷水游泳,持续14天。
慢性束缚法:将需造模的三组大鼠均隔天束缚1次,每次束缚过程四组同步进行,但每天束缚的时间不同,随机确定(每天上午8-11点,或下午2:30-5:30)。每次束缚时,使大鼠钻进自制的束缚筒内(大小以可以装进实验大鼠但不能使其挣扎转头为宜),并调节到其不产生强烈反抗的紧张程度,平架在木板上。6min后取出。在整个束缚过程中,正常组动物在同一环境中,但不予进食和进水。
强制冰冷水游泳法:准备两个游泳池,规格为185cm×58cm×73cm,游泳时水深为50em,水温为10℃±I℃,将同组雌雄大鼠同时分别置于游泳池,10分钟后取出。游泳期间防止大鼠团抱自救或因力竭沉入水中。
1.3 治疗处理各组均在每天造模处理后05h内开始进行治疗处理,每日1次,连续14天。
正常空白组(Ⅰ组)、模型组(Ⅱ组):不进行任何治疗处理;
针刺组(Ⅲ组):针刺治疗,针刺方法为:依据中国中医药出版社出版的《针灸治疗学》慢性疲劳综合征一节,同样选穴肺俞、心俞、肝俞、脾俞、肾俞,参照《实验针灸学》定位。第一组穴位选择肺俞、心俞;第二组穴位选择肝俞、脾俞、肾俞。针刺前先用苦味酸标记以上穴位,然后将大鼠放在自制的铁丝固定笼中,调整笼的大小,以不产生运动为准。两组穴位每日交替选用,采用江苏医疗器械厂生产的0.15寸30号毫针,直刺5～9mm,针刺手法采用捻转补法,留针30min,每5min行针1次;
艾灸组(Ⅳ组):艾灸治疗,选取针刺组同样的穴位,将大鼠固定后以无烟艾条点燃置于穴位上2—3cm处,每穴每次灸10min,两组穴隔天交替进行。
药物组(Ⅴ组):人参皂甙灌胃治疗,人参皂甙粉剂由广州威佳生物化学试剂公司提治疗。本组模型大鼠给予人参皂甙水溶液(70mg/kg/d)灌胃治疗。
1.4 行为学测试方法14天后,造模与治疗结束,立即开始行为学方面的测定。内容包括探究行为及情绪反应(旷场实验)和体力情况及疲劳的程度(鼠尾悬挂实验)。
旷场实验(Open-field法):(参考Katz方法)用于测定大鼠的探究活动和情绪反应。将大鼠置于敞箱底面的中心方格内,以动物穿越底面的格数(四爪均进入的方格方可记数)记录为水平运动次数,以后肢直立次数(两前爪腾空或攀附箱壁)记录为垂直运动次数。室内暗光,安静,每次实验后均将粪便尿液清除干净。每只动物测定1次,每次测定3min。穿行次数少于10次的将不纳入统计。
鼠尾悬挂实验:用于测定大鼠体力情况及疲劳的程度。具体操作为将距大鼠尾端1cm的部分穿过中央钻有直径1cm的孔的一水平有机玻璃板,板离地面1m左右,使大鼠呈倒挂状。大鼠为克服不正常的体位而挣扎活动,但活动一定时间后,出现间断性“不动”,显示“失望”状态。观察5min内大鼠的不动时间(处于完全静止不动状态的总时间1。
1.5 数据的处理采用SPSS18.0统计软件处理。实验结果均以平均值±标准差(X±s)表示,组间差异采用方差分析,用Duncan’s检验。
2 结果
2.1 旷场实验由表1可知,正常组、针刺组、艾灸组与药物组的穿行次数明显多于模型组,差异具有统计学意义,除模型组外各组无明显差异。模型组直立次数的均数少于正常组,但差异不具有统计学意义(考虑实验环境影响);针刺组、艾灸组、药物组的直立次数要多于模型组,差异具有统计学意义。
2.2 鼠尾悬挂实验由表2可知,正常组、针刺组、艾灸组与药物组的不动时间明显少于模型组,差异具有统计学意义,除模型组外各组无明显差异,但艾灸组的不动时间最短。
3 分析与讨论
大量的临床病例及研究证实,CFS发病后,除常见的体力疲劳症状外,常伴有精神抑郁或急躁、健忘等精神神经症状。祖国医学虽无CFS病名之说,但其与古人记载的某些病症在病因、病机、症状乃至治疗都与CFS有相似之处,如张仲景在《金匮要略》中的百合病、脏躁病,李东垣在《脾胃论》中所论的脾胃内伤病。中医认为,CFS病位以肝、脾、肾为主,尤以肝为要,由于积劳内伤或病后久虚不复,脏腑生理功能不相协调,与心、肺、肝、脾、肾五脏的气血、阴阳失调相关。
在旷场实验中,模型组大鼠的穿行次数、直立次数都明显少于正常组,可以看出CFS降低了大鼠的空间探究能力及其对陌生环境的好奇性,有抑郁的倾向。鼠尾悬挂实验中大鼠的不动时间也明显要多于其余各组,说明模型组大鼠经造模后体力下降明显,活动易出现疲劳。
针刺组及艾灸组中,我们根据CFS的病因病机,参考教科书,制定了肺俞、心俞、肝俞、脾俞、肾俞这一组主治穴位。背俞穴是脏腑之气输注于背部膀胱经上的俞穴,与体内脏腑相连系,可以直接调理各脏腑功能失调。肺俞补气行气,心俞调神定志,肝俞、脾俞两穴配合调肝补脾,以解气机之郁滞、复脾胃之升降,肾俞调补真元。各穴共同行气补虚,调补肝脾,调心安神,以恢复五脏功能协调,解除机体疲劳。而药物组,据前人研究,人参皂甙可以通过抑制羟、氧自由基产生、过氧化氢的脂质过氧化作用及加速自由基清楚等途径发挥抗氧自由基的作用,从而起到缓解疲劳的作用。各治疗组的CFS大鼠经相应的治疗后,旷场实验和鼠尾悬挂实验的结果均好于模型组,疲劳症状明显改善,据统计分析差异具有统计学意义。证明以背俞穴为主穴治疗CFS无论是针刺还是艾灸均能取得良好效果,选取背俞穴为主穴直接调理脏腑以治疗CFS的思路值得研究和推广。本次实验未能体现出各治疗组间的治疗效果的明显差异(各治疗组的结果差异不具统计学意义),考虑为实验设计方案的不足,本次实验的重点也不在此。
参考文献
[1]Holmes Cp,Kaplan J.E,et a1.Recent developments in chronic fatigue.Ann In Med,1988;108:387
[2]罗英华,陈敏聪,冯耀华,等.针刺对慢性疲劳大鼠血清IL-2及TNF-α的影响[J],天津中医药,2006,23(3):206-208
[3]王天芳,陈易新,季绍良,等.慢性疲劳动物模型的研制及其行为学观察[J],中国中医基础医学杂志,1999,5(5):25
[4]赵文历,张立实,贾旭东,等.人参皂甙抗疲劳作用的研究进展.中国食品卫生杂志,2008,20(5):445—448