观察钙释放激活钙通道蛋白1(ORAI1)对前列腺癌PC－3细胞侵袭转移能力的影响并探讨其在上皮间质转化(EMT)过程中的作用。
方法将携带ORAI1基因的小干扰RNA(shRNA)慢病毒载体LV－ORAI1－RNAi转染人前列腺癌PC－3细胞(KD组)，同时设对照组(NC组)，并添加转化生长因子β1(TGF－β1)。实时定量反转录聚合酶链反应(RT－qPCR)及Western blot验证抑制ORAI1表达的有效性。采用Celigo划痕实验及Transwell迁移、侵袭实验检测抑制ORAI1对细胞运动及迁移、侵袭能力的影响。采用Western blot检测EMT标志物E－钙黏蛋白(E-cadherin)、N－钙黏蛋白(N-cadherin)、波动蛋白(Vimentin)及smad3、p-smad3在各组细胞中含量的差异。
结果与对照组相比，转染LV－ORAI1－RNAi后，细胞内ORAI1的mRNA及蛋白水平均降低。Celigo划痕实验显示，与NC组(14.38%±0.77%)比较，KD组(10.24%±1.17%)迁移率降低(P<0.05)；与NC＋TGF－β1组(26.21%±2.23%)比较，KD＋TGF－β1组(12.44%±1.29%)迁移率降低(P<0.05)。Transwell迁移实验显示，与NC组(298±14.2)比较，KD组(229±8.4)迁移细胞数目降低(P<0.05)；与NC＋TGF－β1组(338±12.9)比较，KD＋TGF－β1组(216±12.2)迁移细胞数目降低(P<0.05)。Transwell侵袭实验显示，与NC组(79±4.6)比较，KD组(46±3.4)侵袭细胞数目降低(P<0.05)；与NC＋TGF－β1组(123±5.1)比较，KD＋TGF－β1组(66±5.5)侵袭细胞数目降低(P<0.05)。Western blot结果显示，与NC组比较，NC＋TGF－β1组E-cadherin表达下降，N-cadherin和Vimentin表达升高；与NC＋TGF－β1组比较，KD＋TGF－β1组E-cadherin表达水平升高，N-cadherin、Vimentin和p-smad3表达下降。
结论降低ORAI1表达后，PC－3细胞转移能力下降，可能通过TGF－β/smad3信号通路逆转EMT有关。