【摘 要】
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为提高褐藻胶裂解酶活力,采用易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对海洋细菌Tamlana sp.S12中具有代表性的酶组分Alg-2进行体外定向进化.经过2轮易错PCR
【机 构】
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山东大学(威海)海洋学院,山东威海,264209江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡 214122;
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为提高褐藻胶裂解酶活力,采用易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对海洋细菌Tamlana sp.S12中具有代表性的酶组分Alg-2进行体外定向进化.经过2轮易错PCR及96孔板发酵筛选,分别获得2株正突变和2株负突变菌株,其酶比活力分别是亲本(2 675.2 U/g)的162％、241％、53％、11％.酶的动力学分析显示,正突变株P2-81的Km值比亲本降低50％,而负突变株N2-47的Km值比亲本提高106％,表明突变株对底物的亲和力有极大的上升和下降.基因测序及氨基酸序列分析结果表明,Glu、Thr、Ser、Asp和Tyr对褐藻胶裂解酶活力提高起到正面的积极作用,而Lys的突变起到负面的消极作用,后续人工合成的定点突变则进一步证实Asp和Lys的正/负作用.本研究有助于深入理解褐藻胶裂解酶的催化机制,为后续利用理性设计手段改造褐藻胶裂解酶提供理论参考.
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