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以自制的洋葱伯克霍尔德菌固定化脂肪酶为催化剂，在微水相、无溶剂体系中研究了大豆油和甲醇合成生物柴油的工艺。在系统考察了酶用量、醇油比、含水量、反应温度、反应时间、甲醇流加方式等因素对甲酯得率影响的基础上，利用响应面试验设计优化了各主效因子，建立甲酯得率的二次回归方程，获得了最优的工艺条件：加酶量2．4％、加水量7．1％、反应温度40．4℃、反应时间10．7h、醇油比4．5。在此条件下，实验测得甲酯得率为97．2％，与响应面模型预测值96．9％非常吻合，说明该优化方法有效、可靠。