生长抑制因子4基因表达对K562细胞生长的影响

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目的 研究生长抑制因子4(ING4)基因表达对K562细胞增殖的影响.方法 将经过定点突变技术人源化改造的ING4(鼠→人)生长抑制因子4基因酶切并连接到pAdTrack-CMV转移质粒上,然后与腺病毒质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-hING4,将它转染QBI-293A细胞后收获重组腺病毒Ad-hING4(以下简称为Ad-ING4).将Ad-ING4感染K562细胞,光学显微镜下观察病毒感染前后细胞形态的变化,免疫细胞化学分析凋亡因子的改变,激光扫描共聚焦显微镜观察K562细胞的凋亡,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率.结果 成功构建了人ING4腺病毒质粒,获得高滴度的重组腺病毒Ad-ING4,用它感染K562细胞72 h后,FCM法测定细胞凋亡率为19.7%,与空病毒对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),ING4基因能下调K562细胞bcl-2的表达并上调bax的表达,多种方法检测结果表明ING4基因能抑制K562细胞生长,诱导凋亡.结论 重组腺病毒Ad-ING4可以显著抑制K562细胞的生长.
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