论文部分内容阅读
目的 探讨内质网应激(ERS)阻滞剂Salubrinal对人晶状体上皮细胞(HLEC)的保护作用及机制.方法 实验研究.应用H2O2诱导HLEC B3系细胞(HLE-B3)建立氧化应激模型,诱导ERS的发生.分别在H2O2干预和不干预的情况下,加入不同浓度的Salubrinal(10、15、20、25、30、35 μmol/L)培养24 h,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组HLE-B3的增殖活性.实验分组为3组,A组(正常对照组)、B组(H2O2200μmol/L组)、C组(H2O2200μmol/L+Salubrinal 25μmol/L组).采用原位缺口末端转移酶标记法(TUNEL)和流式细胞仪(FCM)检测药物作用48 h后HLE-B3的凋亡情况.Westblot检测不同时间点下各组葡萄糖调节蛋白质78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、半胱氨酸蛋白酶12(Caspase-12)、真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)的磷酸化型p-elF2α的变化.单因素方差分析用于组间均数的多重比较,当方差齐时组间两两差异比较采用Dunnett t检验,当方差不齐时Dunnetts T3用作两两比较.结果 CCK-8试剂盒结果显示,没有H2O2干预时,不同浓度的Salubrinal对HLE-B3的细胞活性无明显抑制作用,存活率分别为(98.6±3.3)％,(98.7±2.6)％,(99.4±3.2)％,(98.6±1.9)％,(98.8±2.5)％,(99.3±3.2)％,(99.5±2.4)％,差异无统计学意义(F=0.09,P=0.10);应用H2O2干预时,随着Salubrinal浓度的升高,HLE-B3存活分别为(52.9±4.7)％,(65.0±3.6)％,(72.9±3.8)％,(84.5±3.6)％,(91.6±2.1)％,(93.1±2.9)％,(92.0±3.3)％,与对照组相比,差异有统计学意义(P值均＜0.01),当Salubrinal浓度大于25 μmol/L时,HLE-B3细胞的存活率增加不明显(P=0.56,0.88).流式细胞仪检测3组的细胞凋亡率分别为(1.9±0.7)％、(8.8±0.5)％、(4.3±0.3)％,各组之间差异有统计学意义(F=396.26,P＜0.01;与A组比较P值均＜0.01).TUNEL染色结果分别为A组(7.7±1.0)％,B组(36.9±1.0)％,C组为(16.7±2.2)％,凋亡指数差异有统计学意义(F=618.39,P＜0.01,与A组比较P＜0.01).West blot结果表明:随着H2O2作用时间的延长,B组中p-elF2α在6h较初始时间点增加(2.16±0.38)倍,GRP78在12h较初始时间点增加(2.56±0.15)倍,CHOP在12h开始升高,持续至24 h,后又逐渐降低,在48 h升高量达初始时间点的(2.49±0.23)倍,Caspase-12在48 h表达明显增加,是初始时间点的(3.53±0.30)倍;C组与B组相比,GRP78、CHOP、p-elF2α表达量增加,而Caspase-12表达降低(GRP78:F=37.85,P＜0.01;CHOP:F=61.09,P＜0.01;Caspse-12:F=22.27,P＜0.01;p-eiF2α:F=15.11,P＜0.01).结论 Salubrinal可以通过抑制内质网应激的凋亡通路,对H2O2诱导的HLE-B3凋亡起保护作用.