【摘 要】
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目的:克隆小鼠牙胚组织中釉基质丝氨酸蛋白酶(EMSP1)成熟肽编码区基因.方法:提取出生后7 d昆明种小白鼠切牙、磨牙牙胚总RNA,逆转录为cDNA,设计两对特异性引物,采用Touchdown
【机 构】
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Dept. of Pathology
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目的:克隆小鼠牙胚组织中釉基质丝氨酸蛋白酶(EMSP1)成熟肽编码区基因.方法:提取出生后7 d昆明种小白鼠切牙、磨牙牙胚总RNA,逆转录为cDNA,设计两对特异性引物,采用Touchdown PCR 和嵌套PCR方法,扩增出小鼠EMSP1起始密码子至终止密码子基因片段.将目的基因连入载体pMD-18T,转化入大肠杆菌JM109,通过蓝白筛选,挑选阳性克隆培养扩增,纯化重组质粒进行限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定.结果:限制性酶切图谱和核苷酸序列分析均表明所克隆cDNA为小鼠700 bp的EMSP1成熟肽基因编码.结论:成功地克隆了小鼠编码EMSP1成熟肽基因片段.
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