【摘 要】
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目的 构建TRAM基因真核表达载体，为研究TRAM的功能提供研究工具。方法 首先采用PCR方法扩增人TRAM蛋白相应的编码序列，将扩增的特定片段克隆至pCMV-N-Flag真核表达载体。然后，对重组载体进行DNA测序，确认序列正确后将重组载体转染至HEK-293T细胞，并用Western blot方法检测TRAM蛋白的表达以评价载体是否构建成功。结果 菌落PCR电泳可检测到800 bp附近出现目的
【机 构】
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首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所
【基金项目】
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北京市自然科学基金（J190010）资助；
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目的 构建TRAM基因真核表达载体，为研究TRAM的功能提供研究工具。方法 首先采用PCR方法扩增人TRAM蛋白相应的编码序列，将扩增的特定片段克隆至pCMV-N-Flag真核表达载体。然后，对重组载体进行DNA测序，确认序列正确后将重组载体转染至HEK-293T细胞，并用Western blot方法检测TRAM蛋白的表达以评价载体是否构建成功。结果 菌落PCR电泳可检测到800 bp附近出现目的条带，质粒DNA测序显示载体插入705 bp的核苷酸序列，其序列与TRAM完全一致。Western blot检测到HEK-293T细胞高表达带Flag标签的TRAM蛋白。结论 基于PCR扩增、双酶切、酶连接扩增片段和载体成功构建带Flag标签的TRAM真核表达载体。构建的质粒可为进一步研究干扰素的调控和抗病毒免疫治疗提供一种研究工具。
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