论文部分内容阅读
目的克隆KIR2DL4 cDNA,并使其在NK-92细胞上获得稳定表达,分析KIR2DL4分子对NK-92细胞功能的调节作用. 方法采用RT-PCR方法,从人蜕膜单个核细胞扩增出KIR2DL4 cDNA,将目的基因亚克隆于逆转录病毒表达载体构建成KIR2DL4-pLNCX 表达载体,将重组质粒转入NK-92细胞,利用单克隆抗体#33进行FACS检测,观察KIR2DL4分子在靶细胞表面的表达.ELISA检测KIR2DL4对IFN-γ分泌的影响,同时根据LDH的释放实验,分析KIR2DL4分子对NK-92细胞毒功能的调节. 结果 KIR2DL4分子在经KIR2DL4-pLNCX转染的靶细胞表面获得稳定高表达,且不影响其他受体在NK-92细胞上的表达水平.KIR2DL4分子能够部分限制NK-92细胞对HLA-G阳性靶细胞的杀伤作用,交联KIR2DL4分子能够诱导IFN-γ的分泌. 结论成功构建了KIR2DL4-pLNCX逆转录病毒表达载体,并使KIR2DL4分子在NK-92细胞上获得功能性的高表达.