【摘 要】
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采用蛹虫草[Cordyceps militaris(L.)Link]野生型菌株CM01为供试材料,以金粉包裹质粒pDHt-gpd A-GFP-bar,运用基因枪法转化,经草铵膦抗性筛选,最终在靶距离6 cm或9 cm,氦气压
【机 构】
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国家食用菌工程技术研究中心农业部南方食用菌资源利用重点实验室上海市农业遗传育种重点实验室上海市农业科学院食用菌研究所,
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采用蛹虫草[Cordyceps militaris(L.)Link]野生型菌株CM01为供试材料,以金粉包裹质粒pDHt-gpd A-GFP-bar,运用基因枪法转化,经草铵膦抗性筛选,最终在靶距离6 cm或9 cm,氦气压力7.58×106 Pa或8.96×106 Pa条件下,获得2个遗传稳定的转化子Gfp2与Gfp3,转化效率为0.4 cfu·μg-1。PCR鉴定与Southern杂交分析显示,草铵膦抗性基因Bar已经以单拷贝或者多拷贝方式整合到蛹虫草转化子的基因组中。蛹虫草转化子的菌丝在荧光显微镜下可以观测到绿色荧光,表明载体携带的绿色荧光蛋白基因在蛹虫草转化子中得到表达。研究结果表明可以把基因枪法应用于真菌蛹虫草,建立了一种简便有效的遗传转化方法,而转化效率需要通过优化基因枪参数设置、受体材料制备等途径进一步提高。
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