【摘 要】
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为了提高腈水合酶基因的重组表达水平,提出了3种基因策略,在重组大肠杆菌中共表达激活子序列、在重组毕赤酵母中表达以及对a亚基的起始密码子进行定点突变.结果表明:对a亚基
【机 构】
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清华大学化学工程系,北京科技大学环境工程系
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为了提高腈水合酶基因的重组表达水平,提出了3种基因策略,在重组大肠杆菌中共表达激活子序列、在重组毕赤酵母中表达以及对a亚基的起始密码子进行定点突变.结果表明:对a亚基的起始密码子进行定点突变的基因策略为最佳方案,突交后的腈水合酶基因在重组E.coli XL1-Blue(pUC18-NHBAM)中表达时,腈水合酶的比酶活(以干菌质量计)提高到51U/mg.进一步以pET28a为载体,插入突变后的腈水合酶基因,构建重组菌株E.coli BL21(DE3)/pETNHM.对优选菌株进行培养条件和诱导条件的优化,腑水合酶的最高比酶活达到450U/mg.
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