【摘 要】
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目的分离培养大鼠破骨细胞,构建CKIP-1过表达慢病毒,观察被CKIP-1过表达慢病毒感染的体外大鼠破骨细胞的细胞增殖情况,探讨CKIP-1基因对体外大鼠破骨细胞增殖的影响。方法分
【机 构】
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浙江中医药大学,浙江中医药大学附属第二医院
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(81373878)
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目的分离培养大鼠破骨细胞,构建CKIP-1过表达慢病毒,观察被CKIP-1过表达慢病毒感染的体外大鼠破骨细胞的细胞增殖情况,探讨CKIP-1基因对体外大鼠破骨细胞增殖的影响。方法分离、培养SD大鼠原代破骨细胞,用抗酒石酸酸性磷酸酶染色法鉴定。构建CKIP-1过表达载体,完成慢病毒包装。将破骨细胞分为A组(破骨细胞空白对照组)、B组(破骨细胞+空载病毒组)、C组(破骨细胞+CKIP-1过表达病毒组),分别进行对应处理,qRT-PCR检测CKIP-1基因表达效果,CCK-8试剂盒检验破骨细胞的相对数量。结果成功鉴定大鼠原代破骨细胞分离培养。qRT-PCR检测破骨细胞中CKIP-1的mRNA水平结果显示:相比A组和C组,在感染CKIP-1病毒的C组,CKIP-1的基因水平有较高表达(P<0.01),CKIP-1过表达载体过表达效果明显,载体构建成功。CCK-8试剂盒检测各组细胞增殖的结果显示:相比A组和C组,感染CKIP-1病毒的C组的细胞增殖比例显著升高(P<0.01)。结论成功分离培养出大鼠破骨细胞。成功构建CKIP-1过表达慢病毒,并感染体外大鼠破骨细胞。CKIP-1的过表达具有促进体外大鼠破骨细胞增殖的功能。
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