【摘 要】
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目的探讨二十碳五烯酸(EPA)对胶质瘤U87细胞替莫唑胺(TMZ)化疗敏感性的影响及其机制。方法(1)体外常规培养U87细胞，加入0、25、50、100、200 μmol/L EPA分别作用12、24、48 h后MTT检测细胞增殖率；(2)将U87细胞分为对照组、EPA组、TMZ组、EPA+TMZ组(EPA、TMZ的浓度分别为25、100 mol/L，EPA预处理时间为12、24或48 h，TMZ
【机 构】
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目的探讨二十碳五烯酸(EPA)对胶质瘤U87细胞替莫唑胺(TMZ)化疗敏感性的影响及其机制。
方法(1)体外常规培养U87细胞，加入0、25、50、100、200 μmol/L EPA分别作用12、24、48 h后MTT检测细胞增殖率；(2)将U87细胞分为对照组、EPA组、TMZ组、EPA+TMZ组(EPA、TMZ的浓度分别为25、100 mol/L，EPA预处理时间为12、24或48 h，TMZ作用时间为24 h)，MTT检测4组细胞的增殖抑制率；(3)将U87细胞分为对照组、EPA组、TMZ组、EPA+TMZ组(EPA、TMZ的浓度分别为25、100 mol/L，作用时间分别为12、24 h)。流式细胞术检测4组细胞凋亡率；Western blotting检测细胞活化半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达，DNA错配修复酶(MGMT)及核因子κB(NF-κB) p65、NF-κB抑制蛋白(IKBα)的表达；免疫荧光染色检测细胞MGMT和NF-κB p65的表达；甲基化特异性PCR(MSP)法检测细胞MGMT基因启动子甲基化水平。
结果(1)50、100、200 μmol/L EPA作用12、24、48 h时对U87细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性；(2)与同样预处理时间的TMZ组比较，EPA+TMZ组U87细胞的增殖抑制率均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；(3)流式细胞术检测显示：与TMZ组[(34.58±4.35)%]比较，EPA+TMZ组U87细胞的凋亡率[(53.28±5.05)%]明显升高，差异有统计学意义(P< 0.05)；Western blotting检测显示：与TMZ组比较，EPA+TMZ组U87细胞活化caspase-3、Bax和IKBα蛋白表达升高，MGMT和NF-κB p65蛋白表达降低，差异有统计学意义(P<0.05)；免疫荧光染色显示EPA+TMZ组细胞MGMT和NF-κB p65蛋白的表达低于TMZ组；MSP检测显示EPA+TMZ组U87细胞MGMT基因启动子甲基化水平高于TMZ组。
结论EPA预处理可提高胶质瘤U87细胞对TMZ的化疗敏感性，其机制可能是通过下调NF-κB信号通路抑制MGMT表达来实现。
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