【摘 要】
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【目的】原核表达禽腺病毒血清4型（Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4）Hexon蛋白，并制备兔抗Hexon多克隆抗体，为FAdV-4Hexon功能研究提供材料。【方法】采用基于PCR的长DNA序列准确合成（PCR-based accurate synthesis,PSA）方法，设计全长拼接引物，在引物两端各设计保护性碱基合成FAdV-4 Hexon基因；利用同源重组
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（NSFC32002313）； 河南省高等学校重点科研项目（20B230001）；
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【目的】原核表达禽腺病毒血清4型（Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4）Hexon蛋白，并制备兔抗Hexon多克隆抗体，为FAdV-4Hexon功能研究提供材料。【方法】采用基于PCR的长DNA序列准确合成（PCR-based accurate synthesis,PSA）方法，设计全长拼接引物，在引物两端各设计保护性碱基合成FAdV-4 Hexon基因；利用同源重组技术将其连接至pCzn1-Hexon表达载体，获得pCzn1-Hexon重组质粒进行原核表达，采用纯化重组蛋白免疫新西兰白兔制备兔抗Hexon蛋白的多克隆抗体。以间接ELISA方法测定多克隆抗体效价；通过Western blotting和间接免疫荧光试验（IFA）鉴定多克隆抗体的特异性。【结果】重组原核表达质粒pCzn1-Hexon经双酶切及测序鉴定证明构建正确；获得的重组蛋白以包涵体的形式表达，分子质量约为41ku；用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔后，通过间接ELISA方法检测抗体效价高达1∶512 000。以制备的多克隆抗体为一抗，通过Western blotting和IFA检测到鸡肝癌细胞（LMH）中的Hexon蛋白表达，表明制备的多克隆抗体能与Hexon蛋白发生特异性反应。【结论】FAdV-4Hexon蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达，制备并纯化的抗Hexon多克隆抗体具有较高的反应性和特异性，该研究为进一步探究Hexon蛋白的生物学功能及其在FAdV-4感染和致病过程中的作用奠定了基础。
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