【摘 要】
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目的 表达白喉毒素无毒变异体CRM197,并考察其载体作用.方法 利用基因工程技术在大肠杆菌B121(DE3)中表达CRM197用金属镍离子亲和层析纯化;以重组CRM197为蛋白载体,在EDAC的
【机 构】
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中国药品生物制品检定所菌种室,北京,100050
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目的 表达白喉毒素无毒变异体CRM197,并考察其载体作用.方法 利用基因工程技术在大肠杆菌B121(DE3)中表达CRM197用金属镍离子亲和层析纯化;以重组CRM197为蛋白载体,在EDAC的作用下,与活化的A群脑膜炎球菌荚膜多糖(GAMP)结合,制备GAMP-rCRM197结合物,免疫BALB/c小鼠,间接ELISA法测定血清中A群脑膜炎球菌多糖特异性IgG抗体,并分析其免疫原性.结果 重组CRM197昕在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的25%左右;Western blot证明重组CRM197具有良好的反应原性;各针接种后,结合物诱生的多糖特异性IgG水平均显著高于GAMP组和GAMP+rCRM197混合物组,具有较强的免疫原性;多次接种产生了免疫增强效应,重组CRM197具有载体蛋白的作用.结论 已在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了重组CRM197,以纯化的重组CRM197作为载体制备的GAMP-rCRM197结合物具有良好的免疫原性,为以重组CRM197为蛋白载体制备其他结合疫苗奠定了实验基础.
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