目的 建立一种稳定且高效的不成熟树突状细胞(imDC)体外培养方法,探讨细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号传导通路抑制剂GW5074对imDC体外诱导同种初始性CD4+T淋巴细胞分化为调节性T淋巴细胞(Treg)的影响.方法 从健康成人外周血单个核细胞(PBMC)中分离、培养成熟树突状细胞(mDC)和imDC,并对mDC和imDC的免疫表型和功能进行鉴定.取新生儿脐静脉血分离初始性CD4+T淋巴细胞.实验分为5组:(1)空白对照组为单纯培养的初始性CD4+T淋巴细胞,不做任何处理;(2)阳性对照组将imDC与初始性CD4+T淋巴细胞以1∶10的细胞比例混合培养;(3)低浓度GW5074组;(4)中浓度GW5074组;(5)高浓度GW5074组.后3组在阳性对照组基础上,分别加入终浓度为8、24和40μmol/L的GW5074.培养5 d后,用流式细胞仪检测初始性CD4+T淋巴细胞转化为Treg细胞的转化率.结果 imDC呈CD1a高表达,CD80和CD83低表达;mDC呈CD1a低表达,CD80和CD83高表达.imDC和mDC的刺激指数分别为1.12±0.03、2.85±0.07.空白对照组,阳性对照组,低、中及高浓度GW5074组的CD4+CD25+Treg转化率分别为(5.81±1.36)%、(35.73±2.07)%、(22.53±2.11)%、(11.55±1.73)%和(4.97±1.83)%,除空白对照组与高浓度GW5074组间的差异无统计学意义(P＞0.05)外,其余各组之间两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 通过应用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素4联合诱导人外周血PBMC可获得高纯度imDC,ERK1/2信号传导通路在诱导免疫耐受中发挥作用,GW5074可抑制初始性CD4+T淋巴细胞向Treg转化。