【摘 要】
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目的:研制针对我国宫颈癌高危相关的HPV16型的治疗性无佐剂蛋白疫苗.方法:应用PCR技术自我国山西宫颈癌高发现场分离到的毒株--HPV16z中获得E6/E7转化基因片段,自卡介苗菌株
【机 构】
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中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所生物检测中心,北京,100021
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目的:研制针对我国宫颈癌高危相关的HPV16型的治疗性无佐剂蛋白疫苗.方法:应用PCR技术自我国山西宫颈癌高发现场分离到的毒株--HPV16z中获得E6/E7转化基因片段,自卡介苗菌株中克隆获得Hsp65基因片段,对E6/E7基因片段定点突变修饰,构建pET28a-Hsp65-E6/E7表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达融合蛋白,并研究重组蛋白的纯化方案和工艺.结果:成功构建pET28a-Hsp65-E6/E7重组表达载体,E6/E7突变位点正确,融合蛋白在亲和层析柱上正确复性和初步纯化,经阴离子交换色谱纯化后蛋白纯度达到95%.结论:该研究为无佐剂治疗性重组蛋白疫苗Hsp65-E6/E7的进一步功能研究奠定了基础.
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