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探讨PNPLA3基因I148M多态性对人肝癌细胞株Huh-7细胞周期的影响及其相关机制。
方法利用构建成功的稳定表达PNPLA3基因野生型和PNPLA3基因I148M突变型的Huh-7细胞株,以空载体细胞为对照,流式细胞术检测转染的Huh-7细胞周期,Western blot方法检测细胞周期调节因子Cyclin D1、p53的蛋白表达情况。荧光定量PCR检测Cyclin D1、p53的mRNA表达情况。两组间比较用独立样本t检验。
结果三组间各细胞周期细胞所占比例的两两比较显示野生型组细胞周期G1期(58.53%±0.35%),G2/M期(24.87%±0.60%),S期(16.60%±0.26%)参数与对照组对应各期(G1期59.27%±0.15%;G2/M期24.23%±0.31%;S期16.50%±0.26%)之间差异无统计学意义(P > 0.05);突变型组与野生型组相比,G1期细胞比例减少(突变型G1期38.37%±0.21%,P < 0.05),S期与G2/M期细胞比例相应增加(突变型S期27.47%±0.35%,G2/M期34.17%±0.15%,P < 0.05)。与对照组相比,突变型组的p53 mRNA相对表达量明显上调(对照组1.06±0.41,突变型组6.54±0.34;P < 0.05);野生型组p53 mRNA相对表达量差异无统计学意义(1.66±0.30,P > 0.05)。Cyclin D1 mRNA各组中的相对表达量差异均无统计学意义(对照组1.00±0.10,野生型组1.06±0.03,突变型1.11±0.04;P > 0.05)。
结论PNPLA3基因I148M多态性通过上调p53的表达引起Huh-7细胞周期紊乱。