【摘 要】
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目的 研究天麻素(Gas)是否通过调控miR-150-5p/N-myc下游调节基因2(NDRG2)通路进而对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤发挥保护作用.方法 将肺泡上皮细胞(A549)分为对照组、感染组、感染+Gas-低组、感染+Gas-中组、感染+Gas-高组、感染+anti-miR-NC 组、感染+anti-miR-150-5p 组、感染+Gas+miR-NC 组和感染+Gas+miR-150-5p组.酶联免疫吸附试验试(ELISA)检测细胞培养液中白细胞介素10(IL-10)和IL-6的表达水平;
【机 构】
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重庆医科大学附属儿童医院心胸外科儿童发育疾病教育部重点实验室,儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地,儿科学重庆重点实验室,重庆400014;陆军军医大学附属第二医院,重庆400000
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目的 研究天麻素(Gas)是否通过调控miR-150-5p/N-myc下游调节基因2(NDRG2)通路进而对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤发挥保护作用.方法 将肺泡上皮细胞(A549)分为对照组、感染组、感染+Gas-低组、感染+Gas-中组、感染+Gas-高组、感染+anti-miR-NC 组、感染+anti-miR-150-5p 组、感染+Gas+miR-NC 组和感染+Gas+miR-150-5p组.酶联免疫吸附试验试(ELISA)检测细胞培养液中白细胞介素10(IL-10)和IL-6的表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-150-5p和NDRG2 mRNA的表达水平;蛋白质印记(Western blot)检测NDRG2蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cleaved-Caspase-3)的表达水平.双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-150-5p和NDRG2的靶向调控关系.结果 与对照组比较,感染组A549细胞培养液中IL-6含量明显升高,IL-10含量明显降低,细胞凋亡率明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与感染组比较,感染+Gas组A549细胞IL-6含量、Bax、cleaved-Caspase-3和miR-150-5p的表达降低,IL-10含量、Bcl-2和NDRG2的表达升高,细胞凋亡率降低,并呈剂量反应关系,有统计学意义(P＜0.05).NDRG2与感染+anti-miR-NC组比较,感染组+anti-miR-150-5p组A549细胞IL-6含量、Bax和miR-150-5p的表达降低,IL-10含量、Bcl-2和NDRG2的表达升高,细胞凋亡率降低(P＜0.05);与感染+Gas+miR-NC组比较,感染+Gas+miR-150-5p组A549细胞IL-6含量、Bax和miR-150-5p的表达升高,IL-10含量、Bcl-2和NDRG2的表达降低,细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Gas可能通过下调miR-150-5p/NDRG2通路表达对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤具有一定的保护作用.
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