【摘 要】
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以针对人活化血小板表面糖蛋白GMP140的单克隆抗体SZ51的单链抗体作为导向分子,以单链尿激酶32 kd变体(Scu-PA-32k)作为效应分子,构建了一种新型的导向性溶栓剂.通过聚合酶链
【机 构】
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北京大学蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划);
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以针对人活化血小板表面糖蛋白GMP140的单克隆抗体SZ51的单链抗体作为导向分子,以单链尿激酶32 kd变体(Scu-PA-32k)作为效应分子,构建了一种新型的导向性溶栓剂.通过聚合酶链式反应(PCR),分别从SZ51的Fab片段基因中扩增出VK和VH区;从尿激酶原基因中扩增出Scu-PA-32 k基因.通过合适的linker及酶切位点,将VK,VH及scu-PA-32k基因相连接并装入表达载体pET-5a中的Nde I位点,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达了重组蛋白.western-Blotting检测到在8 mol/L尿素存在下,该重组蛋白与抗尿激酶的多克隆抗体之间仍有弱的结合反应.表达产物经变复性处理和部分分离纯化后,在纤维蛋白平板上表现有较好的纤溶活性,且这种活性是通过激活纤维蛋白溶酶原为纤溶酶而实现的.重组蛋白纤溶活性的比活达到17 500IU/mg,较好地保留了尿激酶的纤溶活性,重组蛋白的产率约每100 g湿菌为1.5 mg.
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