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摘 要：本文采用高校液相测定了对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠二水合物15.04g、磷酸氢二钠0.0627g，加水溶解并稀释至1000ml，调节pH值至4.5）一甲醇（80：20）为流动相，检测波长为254nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃。对乙酰氨基酚在50～350μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。对乙酰氨基酚的平均回收率为99.5%，RSD为0.73%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量测定。
关键词：对乙酰氨基酚片；对乙酰氨基酚；含量
对乙酰氨基酚片是目前临床中常用的一种解热镇痛药。对乙酰氨基酚片适应症为用于普通感冒或流行性感冒引起的发热，也用于缓解轻至中度疼痛如头痛、关节痛、牙痛、肌肉痛、痛经等。对乙酰氨基酚片每片含主要成份为对乙酰氨基酚0.5克。本文采用高校液相测定了对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量。
1 仪器与试药
HH-601超级恒温水浴（江苏金坛市亿通电子有限公司）；LC600B液相色谱仪（北京朝阳华洋分析仪器有限公司）；屹谱仪器U-1810准双光束紫外可见分光光度计（屹谱仪器制造（上海）有限公司）；中扬EDI高纯水系统一体机（北京中扬永康环保科技有限公司）；FA1004万分之一分析天平（上海书培实验设备有限公司）；PHB-3型笔式pH计（上海三信仪表厂）；博翔兴旺80KHZ高频超声波清洗机（北京博宇宝威实验设备有限公司）。对乙酰氨基酚对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（天津市康科德科技有限公司）、冰醋酸（天津威赛诺科技发展有限公司）、磷酸（淄博丰仓化工有限公司）、甲醇（天津威赛诺科技发展有限公司）、磷酸氢二钠（淄博丰仓化工有限公司）、三乙胺（济南金恒大化工有限公司）、磷酸二氢铵（济南金恒大化工有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠二水合物15.04g、磷酸氢二钠0.0627g，加水溶解并稀释至1000ml，调节pH值至4.5）一甲醇（80：20）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按对乙酰氨基酚峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取对乙酰氨基酚片，研细，精密称取，置50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取对乙酰氨基酚对照品约5mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含100？滋g的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取预胶化淀粉、糊精、羟丙甲纤维素、硫脲、硬脂酸镁、羧甲淀粉钠、碳酸钙、十二烷基硫酸钠，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在对乙酰氨基酚出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为50、100、150、200、250、300、350μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，对乙酰氨基酚对照品在50～350μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.3项下制备对照品溶液，精密吸取对乙酰氨基酚对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.63%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
称取同一批的对乙酰氨基酚片样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.71%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品对乙酰氨基酚峰面积积分值的RSD为0.67%。结果表明对乙酰氨基酚至少在4小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的对乙酰氨基酚对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%，RSD为0.73%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定对乙酰氨基酚片三批样品中对乙酰氨基酚的含量，含量为标示量的99.8%、99.5%、99.6%。
3 讨论
分别考察甲醇-乙腈-pH6.5磷酸盐缓冲液（20∶20∶60），磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠二水合物15.04g、磷酸氢二钠0.0627g，加水溶解并稀释至1000ml，调节pH值至4.5）一甲醇（80：20），磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠二水合物15.04g、磷酸氢二钠0.0627g，加水溶解并稀释至1000ml，调节pH值至4.5）一甲醇（70：30），水-甲醇-三乙胺（60∶40：0.01），0.067moloL-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.02），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80）不同比例的流动相，结果以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠二水合物15.04g、磷酸氢二钠0.0627g，加水溶解并稀释至1000ml，调节pH值至4.5）一甲醇（80：20）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠二水合物15.04g、磷酸氢二钠0.0627g，加水溶解并稀释至1000ml，调节pH值至4.5）一甲醇（80：20）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量测定。对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量应为标示量的95%-105%。
参考文献
[1]陈骁勇，葛玉松.高效液相色谱法测定腰息痛胶囊中对乙酰氨基酚溶出度的研究[J].中国当代医药，2012（33）.
[2]黄小平，万新祥，刘强.对乙酰氨基酚片的溶出速率及生物利用度研究[J].第一军医大学学报，2003（4）.
[3]闫海燕.高效液相色谱法测定小儿氨酚烷胺颗粒中对乙酰氨基酚的含量[J].化学与生物工程，2011（6）.
[4]李秀梅，张伟.高效液相色谱法同时测定复方对乙酰氨基酚片中3组分的含量[J].中国药房，2005（13）.
[5]石向群，方莉，徐秀景，魏山青，張扬.液相色谱法测定对乙酰氨基酚片的含量[J].广州化工，2012（1）.
关键词：对乙酰氨基酚片；对乙酰氨基酚；含量
对乙酰氨基酚片是目前临床中常用的一种解热镇痛药。对乙酰氨基酚片适应症为用于普通感冒或流行性感冒引起的发热，也用于缓解轻至中度疼痛如头痛、关节痛、牙痛、肌肉痛、痛经等。对乙酰氨基酚片每片含主要成份为对乙酰氨基酚0.5克。本文采用高校液相测定了对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量。
1 仪器与试药
HH-601超级恒温水浴（江苏金坛市亿通电子有限公司）；LC600B液相色谱仪（北京朝阳华洋分析仪器有限公司）；屹谱仪器U-1810准双光束紫外可见分光光度计（屹谱仪器制造（上海）有限公司）；中扬EDI高纯水系统一体机（北京中扬永康环保科技有限公司）；FA1004万分之一分析天平（上海书培实验设备有限公司）；PHB-3型笔式pH计（上海三信仪表厂）；博翔兴旺80KHZ高频超声波清洗机（北京博宇宝威实验设备有限公司）。对乙酰氨基酚对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（天津市康科德科技有限公司）、冰醋酸（天津威赛诺科技发展有限公司）、磷酸（淄博丰仓化工有限公司）、甲醇（天津威赛诺科技发展有限公司）、磷酸氢二钠（淄博丰仓化工有限公司）、三乙胺（济南金恒大化工有限公司）、磷酸二氢铵（济南金恒大化工有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠二水合物15.04g、磷酸氢二钠0.0627g，加水溶解并稀释至1000ml，调节pH值至4.5）一甲醇（80：20）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按对乙酰氨基酚峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取对乙酰氨基酚片，研细，精密称取，置50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取对乙酰氨基酚对照品约5mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含100？滋g的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取预胶化淀粉、糊精、羟丙甲纤维素、硫脲、硬脂酸镁、羧甲淀粉钠、碳酸钙、十二烷基硫酸钠，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在对乙酰氨基酚出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为50、100、150、200、250、300、350μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，对乙酰氨基酚对照品在50～350μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.3项下制备对照品溶液，精密吸取对乙酰氨基酚对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.63%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
称取同一批的对乙酰氨基酚片样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.71%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品对乙酰氨基酚峰面积积分值的RSD为0.67%。结果表明对乙酰氨基酚至少在4小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的对乙酰氨基酚对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%，RSD为0.73%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定对乙酰氨基酚片三批样品中对乙酰氨基酚的含量，含量为标示量的99.8%、99.5%、99.6%。
3 讨论
分别考察甲醇-乙腈-pH6.5磷酸盐缓冲液（20∶20∶60），磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠二水合物15.04g、磷酸氢二钠0.0627g，加水溶解并稀释至1000ml，调节pH值至4.5）一甲醇（80：20），磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠二水合物15.04g、磷酸氢二钠0.0627g，加水溶解并稀释至1000ml，调节pH值至4.5）一甲醇（70：30），水-甲醇-三乙胺（60∶40：0.01），0.067moloL-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.02），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80）不同比例的流动相，结果以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠二水合物15.04g、磷酸氢二钠0.0627g，加水溶解并稀释至1000ml，调节pH值至4.5）一甲醇（80：20）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠二水合物15.04g、磷酸氢二钠0.0627g，加水溶解并稀释至1000ml，调节pH值至4.5）一甲醇（80：20）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量测定。对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量应为标示量的95%-105%。
参考文献
[1]陈骁勇，葛玉松.高效液相色谱法测定腰息痛胶囊中对乙酰氨基酚溶出度的研究[J].中国当代医药，2012（33）.
[2]黄小平，万新祥，刘强.对乙酰氨基酚片的溶出速率及生物利用度研究[J].第一军医大学学报，2003（4）.
[3]闫海燕.高效液相色谱法测定小儿氨酚烷胺颗粒中对乙酰氨基酚的含量[J].化学与生物工程，2011（6）.
[4]李秀梅，张伟.高效液相色谱法同时测定复方对乙酰氨基酚片中3组分的含量[J].中国药房，2005（13）.
[5]石向群，方莉，徐秀景，魏山青，張扬.液相色谱法测定对乙酰氨基酚片的含量[J].广州化工，2012（1）.