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目的建立脑心肌炎病毒（ EMCV） TaqMan real-time PCR检测方法。方法根据GenBank中公布的EMCV 3D基因保守区段设计并合成1对引物和1条TaqMan 探针，建立EMCV TaqMan real-time PCR检测方法，且对体系进行优化；对该法进行灵敏性、特异性验证；采用建立的方法对98份猪血清样本进行检测，并与ELISA结果进行比较。结果建立的EMCV TaqMan real-time PCR检测方法线性关系较好，以质粒标准品构建的标准曲线相关系数R2为0．995；灵敏性比普通PCR高100倍，且仅能特异性检出 EMCV；对猪血清样本的检测与 ELISA 法检测结果符合率为98．0％。结论已建立了EMCV TaqMan real-time PCR检测方法，该法灵敏性高、特异性好，可用于EMCV的检测及定量分析。