【摘 要】
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目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)基因修饰大鼠脑皮质神经干细胞(NSCs)后BDNF的表达,并观察其对NSCs体外诱导分化的影响。方法体外分离、培养大鼠胚胎脑皮质神经干细胞并鉴
【机 构】
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中国医科大学组织学胚胎学教研室; 大连医科大学组织学胚胎学教研室; 中国医科大学附属盛京医院神经外科;
【基金项目】
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辽宁省教育厅科学技术研究项目(2008851,2008779)
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目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)基因修饰大鼠脑皮质神经干细胞(NSCs)后BDNF的表达,并观察其对NSCs体外诱导分化的影响。方法体外分离、培养大鼠胚胎脑皮质神经干细胞并鉴定;构建BDNF基因重组质粒,非脂质体法转染NSCs,实验分为pcDNA3.1-BDNF组、pcDNA3.1组和未转染NSCs组。免疫细胞化学技术和RT-PCR检测转染后BDNF蛋白和mRNA的表达;在含5%胎牛血清的分化培养基中诱导分化,βIII-微管蛋白、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和突触素(SYP)免疫细胞化学染色对分化细胞进行鉴定,并观察pcDNA3.1-BDNF转染NSCs分化过程中SYP的表达变化。结果体外培养获得巢蛋白(nestin)阳性的NSCs。成功构建BDNF基因重组质粒,免疫细胞化学和RT-PCR检测均显示,与pcDNA3.1组和NSCs组比较,pcDNA3.1-BDNF组NSCs的BDNF表达明显增强(P<0.05)。pcDNA3.1组和NSCs组比较,无显著性差异(P>0.05)。分化后第4天,各组细胞均可分化为βIII-微管蛋白阳性和GFAP阳性细胞,pcDNA3.1-BDNF组可见少量SYP阳性表达细胞。分化后第7天,与pcDNA3.1组和NSCs组比较,pcDNA3.1-BDNF组NSCs分化为βIII-微管蛋白阳性神经元的比例明显增高,有显著性差异(P<0.05),SYP阳性细胞数增多,表达增强。结论 BDNF转染NSCs具有体外分泌BDNF的能力,能够促进NSCs定向分化为神经元,SYP表达增强,可能在促进神经元之间的突触发生中发挥作用。
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