【摘 要】
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为了研究抗冻蛋白基因是否在新疆荒漠昆虫洛氏脊漠甲Pterocomaloczyi中存在,利用RT-PCR技术克隆获得了洛氏脊漠甲抗冻蛋白的cDNA片段,命名为Plafp743。测序结果表明洛氏脊漠
【机 构】
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新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室; 新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室 乌鲁木齐830046; 乌鲁木齐830046;
【基金项目】
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科技部重大基础研究前期研究专项(2003CCA01000);新疆生物资源基因工程重点实验室开放课题(XJDX0201-2008-04)
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为了研究抗冻蛋白基因是否在新疆荒漠昆虫洛氏脊漠甲Pterocomaloczyi中存在,利用RT-PCR技术克隆获得了洛氏脊漠甲抗冻蛋白的cDNA片段,命名为Plafp743。测序结果表明洛氏脊漠甲Plafp743所编码的蛋白质由94个氨基酸组成,蛋白序列呈现规则结构CTX1X2X3X4CX5X6X7X8X9。利用原核表达载体构建重组质粒pGEX-4T-1-Plafp743,转化Escherichia coliBL21进行融合蛋白表达,SDS-PAGE结果表明抗冻蛋白PLAFP基因以可溶性融合蛋白形式表达,相对分子质量36kD。用Glutathione Sepharose4B亲和柱对表达蛋白进行纯化后,通过赤翅甲Dendroidescanadensis抗冻蛋白的小鼠抗血清进行Western blot分析,结果表明纯化的GST-PLAFP融合蛋白与赤翅甲抗血清能够发生特异性的免疫反应。大肠杆菌的低温抗冻保护实验结果证明,30μg/mL的GST-PLAFP在-6℃对细菌具有显著的保护作用,且随着抗冻蛋白浓度的增加,抗冻保护作用的效果也随之增加。本研究首次报道了从荒漠昆虫洛氏脊漠甲扩增得到抗冻蛋白基因,提示抗冻蛋白可能是荒漠昆虫普遍采取的过冬生存策略,为进一步开发利用昆虫抗冻蛋白奠定了基础。
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