【摘 要】
：
针对细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)和CXC趋化因子受体4型(CXCR4)两个靶点,设计anti-PD-L1&CXCR4双特异性纳米抗体的基因序列,C末端连接组氨酸标签(6×His标签),通过pET-22b(+)重组表达质粒转化大肠埃希菌E.coli BL21,经IPTG诱导表达,以可溶性形式存在于菌体裂解上清液.为了提高双特异性纳米抗体的产量和纯度,采用3种不同的方法进行样品制备和纯化.结果表明,通过机械裂菌并改进缓冲液的盐离子和咪唑浓度以及pH,经His Trap FF亲和色谱柱纯化后,对双特异性
【机 构】
：
上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心,上海200240;上海交通大学分析测试中心,上海200240
论文部分内容阅读
针对细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)和CXC趋化因子受体4型(CXCR4)两个靶点,设计anti-PD-L1&CXCR4双特异性纳米抗体的基因序列,C末端连接组氨酸标签(6×His标签),通过pET-22b(+)重组表达质粒转化大肠埃希菌E.coli BL21,经IPTG诱导表达,以可溶性形式存在于菌体裂解上清液.为了提高双特异性纳米抗体的产量和纯度,采用3种不同的方法进行样品制备和纯化.结果表明,通过机械裂菌并改进缓冲液的盐离子和咪唑浓度以及pH,经His Trap FF亲和色谱柱纯化后,对双特异性纳米抗体分离效果较好,目的蛋白产量超过1 mg/L,纯度可达到97％.同时,anti-PD-L1&CXCR4双特异性纳米抗体能够与细胞表面两个抗原特异性结合,增强IL-2活化的人外周血单个核细胞(PBMC)对胰腺癌细胞株AsPC-1的杀伤能力,为其后续体内药效学评价奠定了基础.
其他文献
近年来,苯丙胺类兴奋剂(amphetamine-type stimulants,ATS)和氯胺酮等新型毒品的滥用人数逐渐增加,已成为全球关注的重要公共卫生问题。合成毒品的滥用和成瘾会增加死亡率,导致人类免疫缺陷病毒和丙肝等的血液传播,而且会严重危害躯体健康(如心血管事件)和神经精神健康(如神经认知障碍、帕金森病、癫痫、抑郁症、自杀、精神病等)。
我国2019年修订的《药品管理法》首次在法律层面提出附条件批准上市,标志着我国正式实施附条件批准上市制度.本文通过比较我国与欧美地区附条件批准上市药品的法规与技术要求,借鉴欧美地区对附条件批准化学药品的药学审评经验,探讨我国附条件批准上市化学药品的药学审评技术要求.
游戏障碍是指持续或反复使用电子或视频游戏的行为模式,表现为对游戏行为失去控制,游戏成为生活中最重要的事情,尽管已经导致社会功能的损害,但是玩游戏的行为仍在继续或升级,并持续较长时间[1]。