【摘 要】
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目的 探讨鼻咽癌来源外泌体通过长非编码RNA牛磺酸上调基因1(LncTUG1)促进内皮细胞(HUVECs)增殖和血管生成的作用及其可能的作用机制.方法 采用脂质体转染法转染CNE1细胞并将其分为Blank组、sh-NC 组、sh-LncTUG1-1 组、sh-LncTUG1-2组和 sh-LncTUG1-3组.将 HUVECs 与外泌体共孵育,设为 PBS 组和CNE1-Exo组或PBS组、CNE1-Exo-sh-NC组和CNE1-Exo-sh-LncTUG1组.RT-PCR实验检测人鼻咽癌细胞株CNE1
【机 构】
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西安医学院第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科,陕西西安710100
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目的 探讨鼻咽癌来源外泌体通过长非编码RNA牛磺酸上调基因1(LncTUG1)促进内皮细胞(HUVECs)增殖和血管生成的作用及其可能的作用机制.方法 采用脂质体转染法转染CNE1细胞并将其分为Blank组、sh-NC 组、sh-LncTUG1-1 组、sh-LncTUG1-2组和 sh-LncTUG1-3组.将 HUVECs 与外泌体共孵育,设为 PBS 组和CNE1-Exo组或PBS组、CNE1-Exo-sh-NC组和CNE1-Exo-sh-LncTUG1组.RT-PCR实验检测人鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2、HONE1、正常鼻咽上皮NP69和人脐静脉HUVECs中LncTUG1的表达;透射电镜观察外泌体形态;Nanosight纳米粒度颗粒跟踪分析仪检测外泌体粒径;PKH67试剂盒检测HUVECs对外泌体的摄取情况;Western blot检测外泌体标志性蛋白CD63、CD9和TSG101蛋白表达;CCK-8试剂盒检测HUVECs细胞活力;EdU实验检测HUVECs细胞增殖;Matrigel血管形成实验检测HUVECs血管形成能力.结果 CNE1、CNE2和HONE1细胞中LncTUG1表达水平均高于NP69细胞(P＜0.01),且CNE1细胞中LncTUG1表达水平最高.成功分离NP69来源外泌体(NP69-Exo)和 CNE1 来源外泌体(CNE1-Exo、CNE1-Exo-sh-NC、CNE1-Exo-sh-LncTUG1),外泌体呈圆形囊泡结构,直径均约为100 nm,且高表达CD63、CD9和TSG101蛋白.PKH67标记的外泌体可被HUVECs摄取.CNE1-Exo组HUVECs中LncTUG1的表达、细胞活力、EdU阳性细胞率、管状网络结构数量明显高于PBS组(P＜0.05).CNE1-Exo-sh-NC组HUVECs中LncTUG1的表达、细胞活力、EdU阳性细胞率和管状网络结构数量明显高于PBS组(P＜0.05),CNE1-Exo-sh-LncTUG1组中HUVECs中LncTUG1表达、细胞活力、EdU阳性细胞率和管状网络结构数量明显低于CNE1-Exo-sh-NC组(P＜0.0 5).结论 鼻咽癌外泌体通过LncTUG1促进内皮细胞增殖和血管生成,在鼻咽癌中发挥重要作用.
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