【摘 要】
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目的:克隆人野生型和突变型PIEN的cDNA,并构建其表达载体,探讨其表达质粒在人胶质瘤U251细胞中的表达情况.方法:分别从新鲜胎盘组织和结肠癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR的方
【机 构】
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中国人民解放军第461医院外科,中国人民解放军93163部队门诊部
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目的:克隆人野生型和突变型PIEN的cDNA,并构建其表达载体,探讨其表达质粒在人胶质瘤U251细胞中的表达情况.方法:分别从新鲜胎盘组织和结肠癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增人野生型和突变型PTEN基因全长cDNA,分别克隆人pMD 18-T载体上,经PCR、酶切鉴定均为阳性的克隆,进行核苷酸序列分析,再分别将两段基因定向克隆入pcDNA3.1(+)载体中构建表达载体.结果:反转录PCR扩增后的产物,在约1.4kb处出现明亮的特异性条带,pcDNA-PTEN-WT细胞的生长曲线生长速度较
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